SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3731.5—2013 食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法 第5部分：鸭成分检测 PCR 法 Identification of poultry ingredient in food and feed- Part 5:Detection of duck ingredientPCR method 行业标准信息服务平台 2013-11-06发布 2014-06-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3731.5—2013 前 言 SN/T3731《食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法》共分为以下6个部分： 第1部分：鹑成分检测PCR法； 第2部分：鹅成分检测PCR法； 第3部分：鸽子成分检测实时荧光PCR法； 第4部分：火鸡成分检测实时荧光PCR法； 第5部分：鸭成分检测PCR法； 第6部分：鹧鸪成分检测实时荧光PCR法。 本部分为SN/T3731的第5部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验 检疫科学研究院。 本部分主要起草人：宗卉、吴亚君、陶虹、花群义、曹琛福、黄文胜、张娟、刘建利、吕建强、卢体康。 行业标准信息服务平台 I SN/T3731.5—2013 食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法 第5部分：鸭成分检测PCR法 1范围 SN/T3731的本部分规定了食品及饲料中鸭成分极测的PCR方法。 本部分适用于食品及饲料中鸭成分的定性检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 多聚酶链式反应polymerasechainreaction；PCR 一种体外扩增DNA的方法。PCR使用一种耐热的多聚酶，以及两条含有20个左右碱基的单链引 物。经过高温变性将模板DNA分离成两条链，低温退火使得引物和一条模板单链结合，然后是中温延 伸，反应液的游离核苷酸紧接着引物从5端到3'端合成一条互补的新链。而新合成的DNA又可以继 续进行上述循环，因此DNA的数目不断倍增。 信息服务平台 3.2 Taq DNA酶Thermus aquaticus DNApolymerase 从Thermusaquaticus细菌中提取的耐热DNA聚合酶。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleosidetriphosphate） CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrithylammoniumbromide） Tris：三（羟甲基）氨基甲烷[tris(hydroxymethyl)aminomethane] EDTA:乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid) DNAMarker：核酸相对分子质量标准 5方法提要 样品经研磨混匀后，提取DNA，以DNA为模板，采用鸭线粒体细胞色素C氧化酶Ⅲ基因特异性检 1 SN/T 3731.5—2013 测引物进行PCR扩增，经电泳，在226bp大小处观察是否有扩增条带，必要时进行测序，来判断样品中 是否存在鸭成分。 6试剂和材料 除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无 DNA酶污染的容器分装。 6.1检测用引物（对）序列 鸭成分扩增引物详见表1。 表1试验用引物 名称 序列（5-3"） 目的基因 鸭成分5'端引物 F:5'-CTCATCTATCCTGCTAGCCGC-3" 鸭线粒体细胞色素C氧化酶Ⅲ基因 鸭成分3'端引物 R:5'-GCCTAGTTCGGGGGTTGGTA-3′ 6.2试剂 6.2.1 裂解液:1% CTAB;0.05 mol/L Tris-HCI(pH8.0);0.7 mol/L NaCl;0.01 mol/L EDTA (pH8.0)。 6.2.2 2DNA聚合酶。 6.2.3 10XPCR缓冲液。 6.2.4 硫酸镁。 6.2.5 dNTP混合液。 75%乙醇。 6.2.6 三氯甲烷。 6.2.7 6.2.8 异丙醇。 信息服务平台 6.2.9 ·Tris-HCl(pH8.0)20mL；加蒸馏水至 1000mL；使用时10倍稀释。 6.2.10 溴化乙锭（或等效染色剂）。 6.2.11 上样缓冲液。 仪器和设备 7.1 离心机（最大离心力大于12000g）。 7.2 微量移液器(100μL~1000μL，20μL~200μL,2μL~20μL,0.5μL~10μL)。 7.3 热循环仪。 7.4 恒温水浴锅。 天平：感量0.001g和0.1g。 7.5 7.6 涡旋振荡器 7.7 pH计。 7.8 电泳仪。 7.9 凝胶成像仪。 2