SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3684—2013 香菜茎瘿病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Protomyces macrosporus Unger 行业标准信息服务平台 2013-08-30发布 2014-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3684—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：贺艳、刘伟、张裕君、崔颖、刘跃庭、刘鹏。 行业标准信息服务平台 SN/T3684—2013 香菜茎病菌检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了香菜茎瘦病菌（ProtomycesmacrosporusUnger）检疫鉴定方法。 本标准适用于来自香菜茎瘦疫区的伞形花科芜萎属和菊科种子及其他主要寄主植物苗木携带的香 菜茎瘦病菌的检疫鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T1157进出境植物苗木检疫规程 3香菜茎病菌基本信息 学名：ProtomycesmacrosporusUnger 分类地位：香菜茎瘦病菌属真菌界（Fungi），子囊菌门（Ascomycota），半子囊菌亚纲（Taphrinomy cetidae），外囊菌目（Taphrinales），原子囊科（Protomycetaceae）原囊菌属（Protomyces）。 传播途径：病菌在土壤中能够长期存活，当年收获遗留田间的植物残渣中的厚垣孢子等成为次年初 侵染源。远距离传播方式为厚垣孢子、休眠孢子随着种子，土壤和植物残渣传播。 香菜茎瘦病菌的其他信息参见附录A。 4原理 信息服务 病原菌的寄主范围（参见附录A)及其病菌在寄主植株上的症状特点、形态学特征（见附录B)作为 香菜茎瘦病菌的检疫鉴定依据。 5 设备和试验用具 5.1仪器设备 体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、生物培养箱、电子天平（感量0.01g）、高压灭菌锅 5.2试验用具 放大镜、灭菌培养血、三角瓶、镊子、手术剪、手术刀、接种针、棉纱、解部刀、酒精灯、标签、载玻片、盖 玻片等。 6i 试剂和培养基 6.1试剂 马铃薯、葡萄糖、琼脂、链霉素、1.0%次氯酸钠（NaCIO）、无菌水、酒精。 1 SN/T3684—2013 6.2培养基 7检验方法 7.1种子检验 将可疑种子用纱布包好。放入1%次氯酸钠溶液消毒5min，灭菌水洗3至4次，灭菌滤纸吸干水 分后，置于PDA选择性培养基平板上，每皿放置3～4粒，置25℃培养，3d后开始观察。解部镜下发现 有褐色菌丝长出，立即挑取菌落边缘菌丝，转入PDA上纯化培养。7d后用显微镜观察，记录其形态特 征，并测定菌丝生长速度、分生孢子梗着生和顶部分枝情况、分生孢子梗长度和宽度、子囊孢子大小等。 7.2苗木检验 7.2.1直接镜检 在病症上加一滴50%乳酸后，观察自然侵染的叶片和茎部里面菌丝和产囊丝以及瘦瘤的横向和纵 向形态，用光学显微镜测量100个产囊丝的平均长度和平均宽度。 7.2.2组织保湿法 在培养血内铺上保湿滤纸，用灭菌水洗采集的病样组织样品3次，置于滤纸上，喷雾保持病样高度 湿润，置于25℃培养箱内在自然光或弱光下培养，3d后取出叶片观察菌丝和产囊丝以及瘦瘤的横向 和纵向形态。 7.2.3分离培养 挑选出的植株残体或可疑的病斑组织剪成0.5cm×0.5cm小段，用纱布包好放入1%次氯酸钠溶 液消毒5min，灭菌水洗3～4次，灭菌滤纸吸干水分后，置于PDA选择性培养基平板上，每皿放置3~ 4片，置于25℃培养，3d后开始观察。解剖镜下发现有褐色菌丝长出，立即挑取菌落边缘菌丝，转入 PDA上纯化培养。7d后用显微镜观察，记录其形态特征，并测定分生孢子梗着生和顶部分枝情况、分 准信息服务 生抱子梗长度和宽度、子囊抱子大小等。 8鉴定特征 8.1症状 香菜茎瘦病菌侵染后，种子变形，肥大，变硬 香菜茎瘦病菌通常在叶片、叶脉、中脉和叶柄部形成瘦瘤。侵染叶片时在叶片上形成黄色凸起，凸 出叶片表层。在叶脉和叶柄部上形成透明的黄白色肿大，延伸像水泡。 后，使得子房肿大，严重时子房萎缩。香菜茎瘦病菌侵染翅果属植物后在荃、叶和果上形成白绿色至褐 色的大瘤或圆形肼眠，但是叶上的瘦瘤通常形成在叶柄、叶脉和细脉上。侵染兰芹属植物时会形成深 褐色瘦瘤。 8.2病原菌特征 8.2.1培养性状 香菜茎瘦病菌可以在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上培养。20℃～25℃培养7d～10d后，产囊丝为 2