SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3676—2013 甘蔗凋萎病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Gibberella sacchari Summerell et Leslie 行业标准信息服务平台 2013-08-30发布 2014-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3676—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局 本标准主要起草人：刘跃庭、崔铁军、罗加凤、刘鹏、廖芳、张裕君。 行业标准信息服务平台 SN/T3676—2013 甘蔗调萎病菌检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了甘蔗调萎病菌的检疫鉴定方法。 本标准适用于甘蔗种子、植株中甘蔗调萎病菌的检疫鉴定。 2甘蔗凋萎病菌基本信息 中文名：甘蔗调菱病菌 学名：GibberellasacchariSummerelletLeslie 无性态：Fusariumsacchari(E.J.Butler)W.Gams 分类地位：甘蔗调菱病菌属真菌界（Fungi），子囊菌门（Ascomycota），子囊菌纲（Ascomycetes），粪 壳菌亚纲（Sordariomycetidae）、肉座菌目（Hypocreales），肉座菌科（Hypocreaceae），赤霉菌属（Gibberella）。 无性态为Fusariumsacchari（E.J.Butler）W.Gams，属丝孢菌纲（Hyphomycetes），丛梗孢目 （Monilales），瘤座孢科（Tuberculariaceae），镰刀菌属（Fusaium）。 传播途径：病菌依靠带菌种子、种苗和病残体进行远距离传播 甘蔗调萎病菌的其他信息参见附录A。 3方法原理 病原菌的为害症状、分离培养性状、形态特征作为甘蔗调萎病菌的检疫鉴定依据。 标准信息 4 仪器设备和主要试剂 4.1仪器设备 培养皿（直径90mm～100mm）、三角瓶、镊子、手术剪、手术刀、接种针、棉纱、脱脂棉、酒精灯。 体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、生物培养箱、电子天平、高压灭菌锅、常规冰箱（一20℃）、超 低温冰箱（一70℃）。 4.2主要试剂 马铃薯、胡萝下、番茄、葡萄糖、琼脂、青霉素、链霉素、乳酸、1.0%次氯酸钠（NaCIO） 5鉴定方法 5.1症状检查 5.1.1甘蔗种子 挑选畸形、瘦小等可疑种子进行分离培养。 1 SN/T3676—2013 5.1.2甘蔗繁殖茎 将甘蔗繁殖茎横切和纵切，检查蔗茎是否变色（参见附录A），对变色的可疑材料进行分离培养。 5.2病原菌的分离培养 5.2.1培养基的制备 马铃薯培养基（PDA）、胡萝卜培养基（CA）、麝香石竹叶培养基（CLA）、V8-汁培养基的制备参见附 录 B。 5.2.2病原菌的分离培养 5.2.2.1甘蔗种子中病原菌的分离培养 将甘蔗种子放入1.0%的次氯酸钠溶液中，消毒5min，灭菌水冲洗3次，用灭菌滤纸吸干水分后， 置于PDA培养基平板上，每皿放置20～30粒，25℃～30℃，12h光照黑暗交替培养。培养3d后开始 观察，发现乳灰白色可疑菌落，转接到CLA培养基平板上诱导大型分生孢子产生，紫外线能促进大型 分生孢子产生；可疑菌落转接到CA或V8-汁培养基上诱导子囊壳的产生。培养3d后开始观察，记录 菌落培养性状，观察大、小分生孢子和子囊壳的产生，在显微镜下观察并测量大、小分生孢子、子囊壳和 子囊孢子的形状及大小。 5.2.2.2甘蔗繁殖茎中病原菌的分离培养 挑选出的甘蔗材料剪成0.4cm×0.4cm小块，用纱布包好，放人1.0%的次氯酸钠溶液中，消毒 5min，灭菌水冲洗3次，用灭菌滤纸吸干水分后，置于PDA培养基平板上，每血放置3～4块，培养方法 同5.2.2.1。 行业标流 6鉴定特征 6.1培养性状 在PDA培养基上菌丝大量生长，开始灰白色，随时间逐渐变为紫色，培养6d～10d后菌落中产生 分生孢子。在PDA上菌落边缘不整齐，生长较缓慢，生长速度约3.9mm/d,气生菌丝纤细。（参见图C.1) 6.2形态特征 有性态：子囊壳表生，青紫色，倒卵形，有疣状突起，表面粗糙。子囊梭形，开裂，内有子囊孢子8个， 直径250μm～390μm（平均310μm），有侧丝。子囊壳在3%的氢氧化钾溶液中不变色，在100%的乳 酸中变成红色。子囊壳由分区明显的内外两层构成，外层厚18um～39um（平均30.6μm），内层厚 4.4μm～5.9μm（平均4.9μm），外层细胞大，内层细胞小。子囊孢子从孢子角溢出，光滑，透明.椭圆形 或倒卵形，两端钝圆，0～1个分隔，一般为1个分隔，分隔处稍缩，子囊孢子大小（28μm～32um）× （3um4.5um）（平均30.4um×4.2um）。子囊壳和子囊孢子的大小是鉴定甘蔗调萎病菌的重要特征 （参见图C.2），甘蔗调萎病菌与近似种的区别参见附录D。 常3个分隔，有时产生蓝色或黑色的菌核。小型分生孢子（9μm～12μm）×（3.0μm～3.5μm），卵形， 无隔，单胞。小分生孢子在单分生孢子梗或聚分生孢子梗上假头状大量产生（参见图C.3）。 2