SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3677—2013 甘蔗壳多胞叶枯病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Stagonospora sacchari Lo & Ling 行业标准信息服务平台 2013-08-30发布 2014-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3677—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国珠海出人境检验检疫局、华南农业大学。 本标准主要起草人：彭仁、习平根、李敏慧、黎财慧、张卫东、廖力、乐海洋、吴长坤、张建军、冯欣、 石振。 行业标准信息服务平台 SN/T 3677—2013 甘蔗壳多胞叶枯病菌检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了甘蔗等寄主植物上的壳多胞叶枯病菌的检疫鉴定方法。 本标准适用于甘蔗壳多胞叶枯病菌的检疫鉴定。 2夫 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样 3甘蔗壳多胞叶枯病菌基本信息 学名:Stagonospora sacchari Lo & Ling 分类地位：真菌界（Fungi），无性型真菌（Anamorphicfungi），壳多胞属（Stagonospora）。 传播途径：主要通过甘蔗等寄主植物叶片带菌传播。 其他信息参见附录A。 4方法原理 根据症状检查、保湿培养、分离培养、病菌形态特征和培养性状观察等方法对病原菌进行判定。 标准信息 5仪器和用具 5.1仪器 体视显微镜、光学显微镜（带显微照相装置）、测微尺、天平（感量0.1g）、超净工作台、光照培养 箱等。 5.2用具 手持放大镜、滤纸、烧杯、培养皿、三角瓶、镊子、剪刀、载玻片、盖玻片、量筒、酒精灯、吸管、解针、 刀片等。 6试剂和培养基 6.1试剂 琼脂、蔗糖、1%次氯酸钠、70%乙醇等。 1 SN/T 3677—2013 6.2培养基 马铃薯蔗糖培养基（PSA，配方参见附录B）。 7 现场检疫 按照SN/T2122规定结合症状检查进行抽样。重点检查叶片被害情况，受侵染叶片产生细长纺锤 形黄褐色的条斑等，详细症状参见附录A。抽取代表性样品送实验室检验 8病原菌鉴定 8.1症状检查 对于有病征出现的病部，用解剖针挑取或用刀片刮取病组织表面的小黑点制片，置于显微镜下 镜检。 8.2保湿培养 无上述明显症状或看似健康的寄主组织材料，进行保湿培养。将寄主组织材料充分湿润后，置于垫 分离培养。 8.3分离培养 织，冲洗掉表面的泥土杂物后，用剪力或解剖刀切取病健交界处组织，切成5mm见方小块，用70%乙 醇表面消毒10s~30s，再用1%次氯酸钠溶液消毒3min~5min，再用灭菌水浸洗3次，用灭菌滤纸吸 培养7d~10d。 8.4病菌形态特征和培养性状观察 显微镜检分生孢子器、产孢细胞和分生孢子的形态特征及大小在25℃～28℃、黑暗条件下培 息服务平 养，观察记录菌落的生长情况、颜色变化、分生孢子器的形成情况。 9鉴定特征 9.1病菌形态 分生孢子器球形或扁球形，直径为150μm～228μm，具有稍微向外突起的孔口，孔口直径17.1um 27.4um，器壁膜质，其厚度为13.7um~17.1um，器壁外层由两到三层不规则的扁平状褐色至黑色 细胞构成，内层细胞壁薄，内壁生有许多短小、纤细和无色的产孢细胞。分生孢子梗缺。产孢细胞的长 度为41um～46μm，宽度为10um~12um。分生孢子产生在产孢细胞顶端，包埋在胶质中。分生孢 子无色，椭圆形，顶端尖细，基部圆形或略微平截，分生孢子直或稍弯曲，（38.5um～51.5um）×（9.8μm~ 22.1um），通常具有3个隔膜，极少有1个或4个隔膜，分隔处稍缢缩，成熟的分生孢子在每个细胞中包 含12个油球（图片参见附录C)。 2