SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3438—2012 南方菜豆花叶病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of southern bean mosaic virus 行业标准信息服务平台 2012-12-12发布 2013-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 行业标准信 中华人民共和国出人境检验检疫 行业标准 SN/T3438—2012 * 中国标准出版社出版 北京市朝阳区和平里西街甲2号（100013） 北京市西城区三里河北街16号（100045） 总编室：（010)64275323 网址 www.spc.net.cn 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本880X×12301/16 印张0.75 字数18千字 2013年6月第一版 2013年6月第一次印刷 印数1—1600 * 书号：155066·2-25288 定价16.00元 SN/T 3438—2012 SN/T 3438—2012 表C.1引物序列、位置和产物 扩增产物 引物名称 序列（5"-3") 位置 bp SBMVf ATGGCGAAGAGGTTGAC 3207~3223 930 SBMVr ACTTTTGGATTACGCTCCATC 4116~4136 72℃5min。也可采用一步法RT-PCR试剂盒进行扩增。 表C.2PCR反应体系 体积 组分 uL 10XPCR缓冲液 2. 5 dNTP(10 mmol/L) 1.0 上游引物（20pmol/μL） 0.5 下游引物（20pmol/μL） 0.5 Taq酶(5 U/μL) 0.2 cDNA模板 3.0 O"HPP 补足反应总体积至25aL C. 2. 3 电泳 C. 2. 3. 1 制备凝胶 配制1.5%（质量浓度）的琼脂糖凝胶。溴化乙锭可直接加人琼脂糖凝胶中（浓度为0.5ug/mL）， 也可在电泳完成后使用溴化乙锭染色。 C.2.3.2电泳 用1uL6X加样缓冲液与5uL样品混合，然后将其和适合的DNA相对分子质量标准物分别加入 到样品孔中。电泳结束后将琼脂糖凝胶置于紫外透射仪上观察，拍照并保留结果。 C.3 结果判断 SBMV阳性对照经SBMV特异引物扩增后在930bp处有扩增片段，阴性对照和空白对照无特异 性扩增，样品出现与阳性对照一致的扩增条带，可判定该样品SBMV阳性；阳性对照、阴性对照和空白 对照正确，样品未出现与阳性对照一致的扩增条带，判定结果为阴性。 书号：155066·2-25288 SN/T3438-2012 定价： 16.00元 SN/T3438—2012 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国厦门出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共 和国云南出人境检验检疫局、中华人民共和国黑龙江出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：陈青、陈岩、李曼、刘忠梅、陈红运、廖富荣、林石明。 行业标准信息服务平台