SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3624—2013 出口食品中弓形菌的检测方法 Detemination of Acrobacter in food for export 行业标准信息服务平台 2013-08-30发布 2014-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3624—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国珠海出人境检验检疫局， 本标准主要起草人：冯家望、游淑珠、王小玉、胡松楠、唐食明、邝筱珊、成晓维、郑立新。 行业标准信息服务平台 SN/T3624—2013 出口食品中弓形菌的检测方法 1范围 本标准规定了食品中弓形菌（Arcobacter）的检验方法 本标准适用于食品中布氏弓形菌、嗜低温弓形菌和斯氏弓形菌的检验。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测 GB/T27405实验室质量控制规范食品微生物检测 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 弓形菌Arcobacter 弓形菌（Arcobacter），为变形菌门（Proteobacteria）e-变形菌纲（Epsilonproteobacteria）弯曲菌目 （Campylobacterales）弯曲菌科（Campylobacteraceae)的一个新属。呈弯曲或螺旋形杆状，不产芽孢，最 佳生长氧气浓度为微量氧气（3%～10%），正常大气氧浓度条件下也可生长的革兰氏阴性细菌。 4生物安全措施 服务平台 为了保护实验室人员的安全，应由具备资格的工作人员检测马形菌，所有培养物和废弃物应参照 GB19489、GB/T27403和GB/T27405中的有关规定执行。 5设备和材料 除微生物实验室常规灭菌与培养设备外，其他设备与材料如下： 5.1冰箱:2℃~8℃。 5.2恒温培养箱：25℃±1℃，30℃±1℃,36℃±1℃。 5.3水浴或其他恒温装置：30℃±1℃，98℃。 5.4微需氧培养装置：提供微需氧条件（5%氧气、10%二氧化碳和85%氮气）。 5.5电子天平：感量0.1g。 5.6均质器。 5.7过滤装置及滤膜（0.22μm.0.45μm）。 1 SN/T 3624—2013 5.8 显微镜：10×～100×，有相差功能。 5.9离心机：离心力≥20000g。 5.10 核酸蛋白分析仪。 5.11 基因扩增仪。 5.12 电泳仪。 5.13 凝胶成像分析系统。 培养基和试剂 除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中一级水的要求。 6.1JM肉汤:见附录A中A.1。 6.2 JM琼脂：见A.2。 6.3 弓形菌琼脂：见A.3。 6.4 布氏肉汤：见A.4。 6.5 布氏琼脂：见A.5。 6.6 氧化酶试剂：见A.6。 6.7 三糖铁琼脂：见A.7。 6.8 Hugh-Leifson培养基：见A.8。 6.9 马尿酸钠水解试剂：见A.9。 6.10 吲哚乙酸醋纸片：见A.10。 6.11 Mueller Hinton 血琼脂:见 A.11。 6.12 1mol/L.Tris-HCl缓冲液（pH8.0）：称取121.1gTris，溶于800mL水中，搅拌，加人浓盐酸42mL 冷却至室温，用稀盐酸准确调整pH至8.0，分装后高压灭菌备用。 6.130.5mol/LEDTA（pH8.0）：在800mL水中加人186.1gNa2-EDTA·2HzO,在磁力搅拌器剧烈 搅拌，用氢氧化钠调节溶度pH值至8.0（约需20g氢氧化钠颗粒），然后定容至1L，分装后高压灭菌 备用。 6.14DNA提取液:量取100 mL1mol/LTris-HCl,50mL0.5mol/LEDTA,称取5.0 g SDS,16.848g氯 化钠，定容至1L，分装后高压灭菌备用。 6.15引物：见表1。 表1# 弓形菌扩增引物名称引物序列、扩增目的基因和扩增片段长度 片段长度/bp 引物名称 引物序列 目的基因 Acro I 5'-AGAGATTAGCCTGTATTGTAT-3' 弓形菌属16SrRNA 1 202 Acro II 5'-ATGCATCCCCGCTTCGAATGA-3' ArcoF 5'-GCYAGAGGAAGAGAAATCAA-3' 布氏弓形菌23SrRNA 2061 ButR 5'-TCCTGATACAAGATAATTGTACG-3 ArcoF 5'GCYAGAGGAAGAGAAATCAA-3" 斯氏弓形菌23SrRNA 198 SkiR 5'-TCAGGATACCATTAAAGTTATTGATG-3 GyrasF 5'AGAACATCACTAAATGAGTTCTCT-3 嗜低温弓形菌GyraseA 395 GyrasR 5'-CCAACAATATTTCCAGTYTTTGGT-3 2