SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3560—2013 国境口岸黄热病毒、登革病毒、基孔肯雅 病毒、西尼罗病毒的多重实时荧光 RT-PCR检测方法 Detecting method for Yellow fever virus,Dengue virus,Chikungunya virus,West Nile virus by multiplex real-time fluorescence RT-PCR at frontier ports 业标准信息服务平台 2013-03-01发布 2013-09-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3560—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验检疫 局、中华人民共和国江苏出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：田桢干、郑夔、李强、孙立新、黄吉城、章琪、李平、曹敏、贾巍、何宇平、张显光、 卢钟山。 行业标准信息服务平台 SN/T3560—2013 国境口岸黄热病毒、登革病毒、基孔肯雅 病毒、西尼罗病毒的多重实时荧光 RT-PCR检测方法 1范围 本标准规定了国境口岸黄热病毒、登革病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒的多重实时荧光RT-PCR 检测方法检验的对象、检测方法、程序及结果报告。 本标准适用于国境口岸人出境人或蚊类携带黄热病毒、登革病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒的实 验室快速筛查检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 WS/T230临床诊断中聚合酶链反应（PCR)技术的应用 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 实时荧光RT-PCR：实时荧光反转录-聚合酶链反应 Ct值：每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数 FAM:FAM荧光染料，一种荧光报告基团 信息服务平台 HEX：HEX荧光染料，一种荧光报告基团 TexasRedTexasRed荧光染料，一种荧光报告基团 CY5：CY5荧光染料，一种荧光报告基团 BHQ：黑洞淬灭基团 LNA：锁核苷酸 4术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 4. 1 黄热病毒Yellowfevervirus 属于黄病毒科黄病毒属成员，为RNA病毒，是引起人类黄热病的病原体。传播媒介为蚊虫。 4.2 登革病毒Denguevirus 属黄病毒科黄病毒属，包括I、Ⅱ、Ⅲ、IV四种血清型，是有包膜的单股正链RNA病毒。登革病毒 1 SN/T3560—2013 可感染人，并引起登革热，严重者甚至可引起登革出血热或登革休克综合症。埃及伊蚊和白纹伊蚊是登 革病毒的主要传播媒介。 4. 3 基孔肯雅病毒Chikungunyavirus 披膜病毒科甲病毒属的第四组，核心含单股RNA。人体感染该病毒后，可以引起基孔肯雅热，该病 起病快，传播范围广。我国南方广泛存在的白纹伊蚊是其主要的传播媒介。 4. 4 西尼罗病毒westNilevirus 黄病毒科黄病毒属的重要成员，其基因组为单股正链RNA分子。西尼罗病毒可感染人，引起西尼 罗热。库蚊是西尼罗热病毒的主要传播媒介。在欧洲和北美为尖音库蚊，在亚洲则为三带喙库蚊和致 倦库蚊。 5仪器和设备 需要如下仪器、设备： 含FAM、HEX、TexasRed.CY5四种荧光检测通道的实时荧光PCR仪； 一生物安全柜； 一普通冰箱； -70℃超低温冰箱； 一普通台式离心机； 一高速冷冻离心机（转速可达20000g）； 微量可调移液器（10μL、100μL、1000μL）及配套带滤芯吸头； 离心管（1.5mL）； 行业标准 涡旋器。 6检测对象 6.1人出境口岸疑似携带黄热病毒、登革病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒的媒介蚊虫。 6.2人出境口岸疑似感染黄热病毒、登革病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒的人员 7检测 7.1准备 实验室生物安全应符合GB19489的规定。PCR防污染措施按WS/T230的要求。 7.2实验室检测 7.2.1标本的采集、运输和保存 7.2.1.1人血清标本 无菌采集发病后5d内静脉血3mL~5mL，室温静置30min使其凝固，然后500g离心10min， 去除纤维蛋白和红血球，收集血清于2mL无菌螺口塑料管中，用耐低温油性记号笔记上编号，于4℃ 送样箱中尽快送到实验室检测，或一70℃以下保存待检。 2