SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3447—2012 草莓簇生植原体检疫鉴定方法 Detection and identification of strawberry multiplier phytoplasma 行业标准信息服务平台 2012-12-12 发布 2013-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3447—2012 行业标准信 中华人民共和国出人境检验检疫 行业标准 草莓族生植原体检疫鉴定方法 SN/T34472012 中国标准出版社出版 北京市朝阳区和平里西街甲2号（100013） 北京市西城区三里河北街16号（100045） 总编室：（010)64275323 网址www.spc.net.cn 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本880×12301/16印张1字数20千字 2013年7月第一版2013年7月第一次印刷 印数1—1600 * 书号：155066·2-25303定价18.00元 SN/T3447-2012 SN/T3447—2012 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国烟台出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：栗智平、耿金培、张京宣、牟海青、鲁闽、栾晶、王颖。 行业标准信息服务平台 SN/T3447—2012 草莓簇生植原体检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了草莓簇生植原体检疫鉴定的基本原则和分子生物学检测方法。 本标准适用于草莓及草莓苗中草莓簇生植原体的检疫和鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T1193基因检验实验室技术要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 聚合酶链式反应polymerasechainreaction 在聚合酶的作用下，以DNA为模板、dNTPs为底物、两条反向的引物对为起点，根据碱基配对原 则，按照DNA的核苷酸顺序，合成与模板互补的DNA链的过程。PCR是一种体外基因扩增技术。 3.2 SYBRGreen实时荧光PCRSYBRGreen realtimePCR SYBRGreen试剂中含有一种荧光染料.这种荧光染料可以与双链DNA结合而产生荧光，利用荧 光信号积累实时监测整个PCR进程。随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度 也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，就可以通过荧光强度变化监测产物量的变 化，从而得到一条荧光扩增曲线图。在整个PCR反应完成后，会生成一条熔解曲线，峰值的高低可以确 定PCR产物的量，单峰表示PCR扩增的强特异性。SYBRGreen实时荧光PCR跟普通PCR引物 样，而不需要另外设计探针。 4方法原理 4.1分类地位 草莓簇生植原体（Strawberrymultiplierphytoplasma）属于植原体16SrI-K亚组。其他信息参见 附录A。 4.2检测原理 本标准检测的主要依据是植原体的基因序列信息。首先，用根据植原体16sRNA基因的通用引物 进行PCR扩增，以确定检疫对象是否为植原体；然后，利用两对草莓簇生植原体的特异性引物，通过 SYBRGreen实时荧光PCR及电泳检测进行结果判定，确定检疫对象是否为草莓簇生植原体。 1