SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3198—2012 猪盖塔病RT-PCR检测技术规范 Quarantine protocol of RT-PCR for swine getah disease 行业标准信息服务平台 2012-10-23发布 2013-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 行业标准 中华人民共和国出人境检验检疫 行业标准 服务平台 猪盖塔病RT-PCR检测技术规范 SN/T3198—2012 * 中国标准出版社出版 北京市朝阳区和平里西街甲2号（100013） 北京市西城区三里河北街16号（100045） 总编室：（010）64275323 网址www.spc.net.cn 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本880×12301/16 印张0.5字数10千字 2013年7月第一版 2013年7月第一次印刷 印数1—1600 * 书号：155066·2-25379 定价14.00元 SN/T3198—2012 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、中华人民共和国南京出人境检验检疫 局、南京农业大学。 本标准主要起草人：王凯民、赵晓燕、姜焱、侯玉峰、李正高、郁兵、刘骏、唐泰山、陈国强、周斌、 张常印。 行业标准信息服务平台 SN/T3198—2012 猪盖塔病RT-PCR检测技术规范 1范围 本标准规定了猪盖塔病的检疫规范。 本标准适用于猪盖塔病的流行病学调查和口岸检疫。 23 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3丝 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 Getah：盖塔病 4试剂与材料 4.1试剂 4.1.1电泳缓冲液TAE配制方法见附录A.1,1.0%琼脂糖凝胶板制备见附录A.2。 对照。 4.1.3引物： 引物 1(20 pmol/μL)CAP-1:5'-cgcctcgagatgaattacattccaactcaa-3 引物2(20pmol/μL)CAP-2:5'-ctcctgcagccattcttctgttccttctgg-3 息服务平台 4.1.4RT-PCR反应试剂:PCR反应缓冲液、AMV反转录酶、RNaseinhibitor酶和Taq酶、dNTPs、 MgCl2、DEPC处理灭菌蒸馏水。 4.1.5电泳加样缓冲液：6×loadingbuffer。 4.1.6DNA相对分子质量标记：100bp~2000bp。 4.2 材料 4.2.1PCR热循环仪。 4.2.2日 电泳仪。 4.2.3凝胶成像系统。 5操作方法 5.1样品处理 5.1.1蚊虫样品处理 取待检的蚊虫整体与用DEPC处理水配置的PBS研磨液按1：10O比例混合置于研磨器中，在冰浴 1