SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T30692011 苹果和梨果实球壳孢腐烂病菌 检疫鉴定方法 Detection and identification of Sphaeropsis pyriputrescens 行业标准信息服务平台 2011-09-09发布 2012-04-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3069—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国北京出人境检验检疫局、青岛农业大学。 本标准主要起草人：邓丛良、李宝华、吕玉峰、张凯、梁新苗、汪万春、高文娜。 行业标准信息服务平台 SN/T3069—2011 苹果和梨果实球壳抱腐烂病菌 检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了植物检疫中苹果和梨果实球壳孢腐烂病菌的检疫鉴定方法。 本标准适用于来自苹果和梨果实球壳孢腐烂病菌发生国家或地区相关寄主新鲜果实中的苹果和梨 果实球壳抱腐烂病菌的检疫鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T2077进出境苹果检疫规程 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 子实体fruitbody 无论是无性繁殖或有性繁殖、结构简单的或复杂的真菌产孢机构，统称为子实体。 3. 2 分生孢子器 sporodochidium 半知菌球壳孢目真菌形成的一种子实体，球形或瓶形，产生分生孢子。 3.3 分生孢子condidium 半知菌的分生孢子着生在散生、束生的分生孢子梗或分生孢子座上，或着生在分生孢子盘或分生孢 服务平台 子器内。分生孢子的形态变化很大，大致可分为7种类型。 4方法原理 4.1分类地位 英文名：SphaeropsisRot 学名：SphaeropsispyriputrescensXiao&J.D.Rogers2004 苹果和梨果实球壳孢腐烂病菌属真菌界（Fungi），半知菌亚门（Deuteromycotina），腔菌纲（Coelo mycetes），球壳孢目（Sphaeriales）。 4.2检疫鉴定依据 以病菌在寄主上的症状特点、病菌形态学特征及其培养特性、病菌种的特征以及基因组序列作为苹 果和梨果实球壳孢腐烂病菌的检疫鉴定依据，必要时辅助进行致病性测定（见附录A、附录B、附录C、 SN/T3069—2011 附录 D)。 5设备及用具 5.1仪器设备 体视显微镜、生物显微镜、电子天平（感量0.01g）、高压灭菌器、超净工作台、生物培养箱（带荧光 灯）、高速离心机、PCR仪、实时荧光PCR仪，凝胶电泳和成像系统。 5.2实验用具 标签、定性滤纸、样品袋、保鲜袋、手持放大镜、镊子、解剖刀、酒精灯、接种针、培养皿（直径9.0cm）、烧 杯（500mL）、量筒（500mL）、三角瓶（250mL）、载玻片、盖玻片、微量移液器（可调式范围：2.5μL~ 1000μL)、移液器枪头（10μL、100μL、1000μL)。 6试剂和培养基 6.1试剂 1%NaCIO溶液、无水乙醇、70%乙醇、无菌双蒸水、2%CTABDNA提取缓冲液、10%SDS溶液、 准（DL2000Marker）、0.5XTBE电泳缓冲液。 6.2培养基 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA)（见附录A）。 7标准菌株 8抽样 口岸查验进境水果时，按SN/T2077对来自疫区的苹果和梨果实球壳孢腐烂病菌寄主的新鲜果实 进行抽样与取样。 9检验方法 9.1现场检验 将有明显病症病果置于体视显微镜下检查，或直接挑取病部病原体制成玻片，置于生物显微镜下检 查，观察记录有无病菌的分生孢子座、分生孢子器以及分生孢子的形态特征和着生方式，并测量其大小。 9.2实验室检验 9.2.1显微镜检 将有明显病症病果置于体视显微镜下检查，或直接挑取病部病原体制成玻片，置于生物显微镜下检 2