SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2800—2011 进出口蜂王浆中四环素类兽药残留量检测 方法 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of tetracyclines residues in royal jelly for import and export-HPLC-MS/MS method 行业标准信息服务平台 2011-02-25发布 2011-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2800—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局 本标准主要起草人：陈笑梅、黄超群、谢文、丰金平、刘海山。 行业标准信息服务平台 SN/T2800—2011 进出口蜂王浆中四环素类兽药残留量检测 方法液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了蜂王浆中土霉素（oxytetracycline，OTC）、四环素（tetracycline，TC）去甲金霉素 （demethylchlortetracycline，DMCTC)，金霉素（chlorotetracycline，CTC)和强力霉素（doxycycline，DC） 残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于蜂王浆中土霉素、四环素、去甲金霉素、金霉素和强力霉素残留量的测定。 2方法提要 试样中的待测抗生素用EDTA-Mcllvaine缓冲液提取，甲醇沉淀样品中的蛋白质，清液过HLB固 相萃取柱和COOH型离子交换柱净化。液相色谱-串联质谱法测定样品中的待测物，外标法定量。 3试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为超纯水。 3.1甲醇：液相色谱级试剂。 3.2乙睛：液相色谱级试剂。 3.3乙酸乙酯：液相色谱级试剂。 行业标准信 3.4草酸(C,H,O,·2H,0)。 3.5 磷酸氢二钠。 3.6 柠檬酸(CHO·H,O)。 3.7 乙二胺四乙酸二钠（Na²·EDTA)。 3.8氢氧化钠。 3.90.2mol/L磷酸氢二钠溶液：称取28.41g磷酸氢二钠溶于适量水，再定容至1000mL。 3.100.1mol/L柠檬酸溶液：称取21.01g柠檬酸溶于适量水，再定容至1000mL。 3.11McIlvaine缓冲溶液：将625mL0.2mol/L磷酸氢二钠溶液（3.9）与1000mL0.1mol/L柠檬 酸溶液（3.10）混合，用磷酸调节pH=4.0。 （3.11)中，使其溶解摇匀。 3.13氢氧化钠溶液：1mol/L。 3. 145 5%（体积分数）甲醇水溶液，将5mL甲醇与95mL水混合摇匀。 3. 15 甲醇-乙酸乙酯混合液：将10mL甲醇与90mL乙酸乙酯混合摇匀。 3.160.01mol/L草酸溶液：称取1.26g草酸溶于适量水，再定容至1000mL。 3. 17 草酸-乙腈混合液（80十20，体积比）：将80mL草酸溶液（3.16）与20mL乙腈混合摇匀。 3.18 四环素族抗生素标准品：土霉素盐酸盐（OTC·HCI)纯度大于等于97.9%，四环素盐酸盐 （TC·HCI)纯度大于等于97.0%，去甲金霉素盐酸盐（DMCTC·HCI)纯度大于等于99.0%，金霉素盐 酸盐（CTCHCI)纯度大于等于99.0%，强力霉素（DC)纯度大于等于96.5%。 1 SN/T 2800—2011 3.19标准储备液：分别称取OTC·HCl10.8mg，TC·HCl11.0mg,DMCTC·HCl10.8mg， CTC·HCl10.8mg，DC10.4mg，用甲醇溶解并定容到100mL容量瓶中，溶液浓度为0.1mg/mL， 一18℃保存，有效期6个月。 3.20混合标准中间液：分别准确移取适量0.1mg/mLOTC、TC、DMCTC、CTC、DC储备液（3.19）， 用甲醇稀释定容为20ng/mL，0℃～4℃保存，有效期1个月。 3.22HLB固相萃取柱：500mg6mL。使用前分别用5mL甲醇和10mL水预洗并保持柱体湿润。 3.23离子交换柱：COOH型固相萃取柱，500mg，3mL。使用前用5mL乙酸乙酯预洗并保持柱体 湿润。 4仪器和设备 4.1液相色谱-质谱/质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 4.2离心机（2500g）。 4.3混匀器。 4.4真空固相萃取装置。 4.5 pH计。 4.6具盖塑料离心管：50mL。 4.7电子天平。 5制样 5.1试样的制备 将抽取的样品充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内，一份作为留样保存，另一份作为试样供 检测用。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生含量的变化。 5.2试样的保存 信息服务 试样宜及时检测，在不能及时检测的情况下，应置于一18℃以下冷冻保存。 6测定步骤 6.1提取 称取蜂王浆2g（精确至0.01g），置于50mL离心管中，加人5mLEDTA-Mcllvaine缓冲溶液，在 混匀器上混匀1min，再加入5mL甲醇混匀，离心（2500g）10min，上层清液转移到50mL容量瓶中。 下层沉淀加10mLEDTA-Mcllvaine缓冲溶液，混匀1min，离心（2500g）5min后，把上层清液转移到 50mL容量瓶中。重复操作一次。用EDTA-Mcllvaine缓冲溶液把提取液定容至50mL。取25mL~ 50mL移入离心管中，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH为6.0，待净化用。 6.2HLB固相萃取柱净化 将上述提取液过预先淋洗好的HLB固相萃取柱，再用5mL甲醇水溶液（3.14）淋洗，减压抽干 20min，弃去全部淋出液。加10mL甲醇-乙酸乙酯混合液（3.15）以1mL/min的流速洗脱，收集洗脱 液，摇匀。 2