SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2579—2010 进出口蜂王浆中10种硝基咪唑类 药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of ten nitroimidazoles residues in royal jelly for import and export- 标准信息服务平台 LC-MS/MS 2010-05-27发布 2010-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2579—2010 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国浙江出入境检验检疫局负责起草。 本标准主要起草人：谢文、陈笑梅、丁慧瑛、奚君阳、张慧敏。 行业标准信息服务平台 SN/T2579—2010 进出口蜂王浆中10种硝基咪唑类 药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了进出口蜂王浆中硝基咪唑及其代谢物残留测定的制样和液相色谱-质谱/质谱测定 方法。 本标准适用于蜂王浆中羟基甲硝唑、2-甲硝咪唑、羟基二甲硝咪唑、甲硝唑、二甲硝咪唑、洛硝哒唑 氯甲硝咪唑、苯硝咪唑、羟基异丙硝唑、异丙硝唑残留量的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 用甲醇沉淀样品中蛋白质，上清液加磷酸盐缓冲溶液后，乙酸乙酯提取，再用Oasis（HLB）和C18固 相萃取小柱净化，液相色谱质谱/质谱测定，外标法或内标法定量。 4试剂和材料 浩息服务平台 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1乙睛：高效液相色谱级。 4.2甲醇：高效液相色谱级。 4.3 乙酸乙酯：高效液相色谱级。 4.4 甲酸：高效液相色谱级。 4.5氯化钠。 4.6 磷酸二氢钠。 4.7 氢氧化钠。 4.80.1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g氢氧化钠，并用水稀释至1L。 4.9磷酸盐缓冲溶液：溶解13.8g磷酸二氢钠于950mL水中，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节溶液 pH值到8.0,最后用水稀释至1L。 唑、羟基异丙硝唑、异丙硝唑标准品：纯度大于等于98%，见附录A表A.1。 4.11羟基二甲硝咪唑-D3、二甲硝咪唑-D3、洛硝哒唑-D3、羟基异丙硝唑-D3、异丙硝唑-D3同位素标准 品：纯度大于等于98%。 1 SN/T2579—2010 4.12标准储备溶液：分别称取经折算适量标准品（4.10）（精确至0.1mg），分别用甲醇溶解并定容至 100mL，溶液浓度为100ug/mL，1℃～4℃冰箱保存。有效期3个月。 4.13同位素内标标准储备溶液：分别称取适量标准品（4.11)（精确至0.1mg），分别用甲醇溶解定容 至100mL，溶液浓度为100μg/mL，1℃~4℃冰箱保存。 溶液。 4.15标准工作溶液：根据需要用空白样品提取液（4.14）将标准储备液稀释成浓度为5ng/ml、10ng/ml 20ng/mL、50ng/mL、60ng/mL的混合标准工作溶液，相当于样品中含有5μg/kg、10ug/kg、20μg/kg、 50ug/kg、60μg/kg硝基咪唑类药物。二甲硝咪唑-D3、洛硝哒唑-D3溶液浓度为20ng/mL，羟基二甲 硝咪唑-D3、羟基异丙硝唑-D3、异丙硝唑-D3溶液浓度10ng/mL。 4.16Oasis（HLB)固相萃取小柱，500mg，5mL或相当者。使用前依次用5mL甲醇，5mL水预洗 4.17Cls固相萃取小柱，500mg，3mL或相当者。使用前依次用5mL甲醇预洗。 4.18微孔滤膜：0.45μm，有机相。 5仪器和设备 5.1高效液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2天平：感量为0.0001g和0.01g。 5.3固相萃取装置。 5.4离心机：大于等于6000r/min。 5.5pH计:测量精度士0.02pH单位 5.6旋涡混合器。 5.7减压浓缩仪。 6试样制备与保存 6.1取500g代表性蜂王浆样品，在室温下解冻，等样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分别装 入样品瓶中，密封，并标明标记。一份作为试验样，另一份在一18℃保存。 服务平台 6.2在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。 7测定步骤 7.1提取 称取2g试样（精确到0.01g)置于50mL具塞离心管中，加0.2mL二甲硝咪唑-D3、洛硝哒唑-D3 同位素内标溶液（200ng/mL）,羟基二甲硝咪唑-D3、羟基异丙硝唑-D3、异丙硝唑-D3同位素内标溶液 （100ng/mL），加10mL水，混匀，静置2min，再加甲醇至20mL，于旋涡混合器上以2000r/min混匀 1min，以6000r/min离心10min，移取10.0mL上清液，加10mL磷酸盐缓冲溶液（4.9)稀释，混匀， 加2g氯化钠和20mL乙酸乙酯提取，于旋涡混合器上以2000r/min，混匀1min，以6000r/min离心 5min，将上层乙酸乙酯收集于浓缩瓶中，样品残渣再加20mL乙酸乙酯，重复上述操作，合并乙酸乙酯 提取溶液，在45℃以下水浴减压浓缩至近干。 2