SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 25782010 进出口蜂王浆中15种喹诺酮类 药物残留量的检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of fifteen quinolones residues in royal jelly for import and export-LC-MS/MS 业标准信息服务平台 2010-05-27发布 2010-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2578—2010 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国浙江出入境检验检疫局负责起草。 本标准主要起草人：谢文、陈笑梅、丁慧瑛、钱艳、刘海山、张慧敏。 行业标准信息服务平台 SN/T 2578—2010 进出口蜂王浆中15种喹诺酮类 药物残留量的检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了进出口蜂王浆中喹诺酮残留量测定的制样和液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本标准适用于蜂王浆中麻保沙星、依诺沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星、 洛美沙星、奥比沙星、双氟沙星、沙拉沙星、司帕沙星、恶喹酸、萘啶酸、氟甲喹残留量的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 用甲醇沉淀样品中蛋白质，上清液用Oasis（HLB）固相萃取小柱净化，液相色谱-质谱/质谱测定， 行业标 外标法或内标法定量。 4试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 信息服务平 4.1乙睛：高效液相色谱级。 4.2甲醇：高效液相色谱级。 4.3甲酸：高效液相色谱级。 4.4 氨水：25%~28%。 4.5甲醇水溶液：甲醇-水（1十9，体积比） 4.65%氨水甲醇溶液：氨水-甲醇（5十95，体积比）。 4.7麻保沙星、依诺沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星、洛美沙星、奥比沙星、双 氟沙星、沙拉沙星、司帕沙星、恶喹酸、萘啶酸、氟甲喹、诺氟沙星-D5、环丙沙星-D8标准品：纯度大于等 于96%，见附录A表A.1。 4.8标准储备溶液：分别称取经折算适量标准品（4.7)（精确至0.1mg），分别用甲醇溶解定容，溶液浓 度为100μg/mL，1℃~4℃冰箱保存。有效期3个月。 4.9诺氟沙星-D5、环丙沙星-D8同位素内标标准储备溶液：分别称取适量标准品（4.7），分别用甲醇溶 解定容，溶液浓度为100μg/mL，1℃～4℃冰箱保存。 4.10空白样品提取液：用不含15种喹诺酮的蜂王浆样品，按照第7章制备空白样品溶液。 1 SN/T 2578—2010 4.11标准工作溶液：根据需要用空白样品提取液（4.10）将标准储备液稀释成2ng/mL、2.5ng/mL 5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL的混合标准工作溶液，相当于样品中含有4μg/kg、5μg/kg、10μg/kg、 20μg/kg、40μg/kg喹诺酮类药物。内标溶液浓度为7.5ng/mL。 4.13微孔滤膜：0.45μm，有机相。 5仪器和设备 5.1高效液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2天平：感量为0.0001g和0.01g。 5.3固相萃取装置。 5.4离心机：大于等于6000r/min。 5.5旋涡混合器。 5.6 旋转蒸发器。 5.7具塞离心管：聚四氟乙烯，50mL。 6试样制备与保存 取500g代表性蜂王浆样品，在室温下解冻，等样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分别装入 样品瓶中，密封，并标明标记。一份作为试验样，另一份在一18℃保存。在制样的操作过程中，应防止 样品污染或发生残留物含量的变化。 行业楼 7测定步骤 7.1提取 （150ng/mL）和10mL水，混匀，静置2min，再加甲醇至20ml，于旋涡混合器上以2000r/min混匀 1min，以6000r/min离心5min，过滤，移取5.0mL上清液，加25mL水，混匀，待净化。 7.2净化 将溶液转移至OasisHLB固相萃取小柱中（4.12），弃之流出液，加5mL水和5mL甲醇水溶液 （4.5）淋洗，抽干，用4mL5%氨水甲醇洗脱（4.6），控制流速1mL/min~2mL/min，收集全部洗脱液 于10mL离心管中，将洗脱液用乙腈转移至浓缩瓶中，在45℃以下水浴下减压浓缩至近干，用1.0ml 乙睛-甲醇一0.15%甲酸（2十20+78，体积比）溶解残渣，混匀，过0.45um，滤膜，供液相色谱-质谱/质 谱仪测定。 7.3测定 7.3.1液相色谱-串联质谱条件 a） 色谱柱：Cg柱，150mm×4.6mm（内径），5μm或相当者； b）流动相梯度洗脱程序见表1； 2