SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2974—2011 牛巴贝斯虫病检疫技术规范 Quarantineprotocolforbovinebabesiosis 行业标准信息服务平台 2011-09-09发布 2012-04-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2974—2011 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准与OIE《陆生动物疾病诊断试验和疫苗标准手册》（2008年版）中第2.4.2章“牛巴贝斯虫 病”的一致性程度为非等效。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国四川出人境检验检疫 局、四川农业大学。 本标准主要起草人：姜红、王玉玲、赵祥平、余华、杨光友、严玉宝、胡娟。 行业标准信息服务平台 SN/T 2974—2011 牛巴贝斯虫病检疫技术规范 1范围 本标准规定了牛巴贝斯虫病病原鉴定、酶联免疫吸附试验和间接荧光抗体试验 本标准适用于牛巴贝斯虫病的检疫。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3疾病概述 牛巴贝斯虫病由牛巴贝斯虫（Babesiabovis）、双芽巴贝斯虫（B.bigemina）、分歧巴贝斯虫（B. divergens)等寄生原虫引起。该病可以引起牛的高热、全身循环性休克，血红蛋白尿以及某些神经症 状，严重可导致死亡。参见附录A。 牛巴贝斯虫病的诊断方法主要包括：病原鉴定和血清学检查。病原鉴定中传统的方法是显微镜检 查。该方法可检测出低至10个红细胞感染1个虫体。血清学实验包括间接免疫荧光试验和酶联免疫 吸附试验。其中，间接免疫荧光试验已广泛用于检测巴贝斯虫抗体，但一个突出的缺点是检测样品数量 少，带有一定主观性。 4诊断技术 4.1镜检法 4.1.1仪器和设备 普通显微镜。 4.1.2试剂和材料 姬姆萨染色液，配制方法参见附录B。实验用水应符合GB/T6682要求。 4.1.3采样部位 因牛巴贝斯虫通常分布在毛细血管血液里，活牛样品最好取自耳尖或尾尖的毛细血管；牛双芽巴贝 斯虫和分歧巴贝斯虫均匀地分布于全身血液，如不能采集毛细血管血液做新鲜涂片，也可无菌采集颈静 脉血加人抗凝剂EDTA（1mg/mL），5℃保存，几小时内送达实验室。病死牛样品除薄血涂片外，还应 有取自大脑皮层、肾、肝、肺和骨髓的组织涂片。 4.1.4血涂片的制备 在洁净的载玻片三分之一处蘸一小滴血，以一端缘光滑的载玻片为推片，将推片的一端置于血滴之 1 SN/T 2974—2011 前，待血液沿推片端缘扩散后，自左向右推成薄血膜，待其自然风干后，无水甲醇固定1min，10%姬姆 萨染色20min30min，此为薄血涂片；取一小滴血液（约50μL)滴在干净的载玻片上，待血滴风干后， 80℃加热固定5min，10%姬姆萨染色15min～20min，此为厚血涂片。虫种鉴别以薄血涂片为好。 4.1.5组织涂片的制备 脏器涂片的制作可用一块干净的玻片轻触脏器的新鲜切面或以两块洁净的玻片轻夹一小块组织， 沿玻片的纵向推压，使两玻片上都留下一层组织。涂片风干后，无水甲醇固定5min，再用10%姬姆萨 染色20min～30min。如果样品取自牛死亡后24h或更长时间，其结果不可靠。 4.1.6显微镜观察 用油镜检查所有染色涂片（见图1、图2）。牛巴贝斯虫较小，通常位于红细胞中央，其平均长宽约为 (1.0μm~1.5μm）×（0.5μm~1.0μm），虫体常成对出现，且一端相连呈钝角。分歧巴贝斯虫也较 小，其形态与牛巴贝斯虫非常相似，所不同的是呈钝角的成对虫体常位于红细胞边缘。双芽巴贝斯虫较 长，成对虫体往往呈锐角相连，虫体呈典型梨形，但也有形状各异的单个虫体存在，长3.0μm3.5um， 宽1.0μm～1.5μm，成对排列的两个虫体各有两个不相连的红染点（牛巴贝斯虫和分歧巴贝斯虫往往 只有一个红染点）。 a) c) d) e) 图 1 牛红细胞内的双芽巴贝斯虫 务平台 b) d) 图2牛红细胞内的牛巴贝斯虫 4. 2 血清学方法 4.2. 1 间接免疫荧光实验 4. 2. 1. 1 仪器和设备 4. 2. 1. 1. 1 烘箱。 4. 2. 1. 1. 2 水浴箱。 4. 2. 1. 1. 3 荧光显微镜。 2