SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T2670—2010 番茄环斑病毒检疫鉴定方法 Quarantine identification of tomato ringspot virus 行业标准信息服务平台 2010-11-01发布 2011-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2670—2010 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共 和国北京出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：陈红运、邓丛良、陈青、赵文军、黄文胜、廖富荣、林石明、朱水芳。 行业标准信息服务平台 SN/T 2670—2010 番茄环斑病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了番茄环斑病毒检疫鉴定方法 本标准适用于可能携带番茄环斑病毒的进境种子、苗木、组培苗等繁殖材料的检疫与鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T1860植物病毒免疫电镜检测方法 SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样 3原理 3.1学名与分类地位 学名：tomatoringspotvirus 缩写：ToRSV 分类地位：豇豆花叶病毒科（Comoviridae）；线虫传多面体病毒属（Nepovirus）。 其他资料参见附录A。 3.2粒体形态 番茄环斑病毒粒体为等轴对称二十面体，直径28nm。 3.3基因组 基因组由两条单链正义RNA组成,RNA1为8.2kb,RNA2为7.3kb。多个分离物的基因组已被 测序，各分离物之间序列同源性较低，根据依赖于RNA的RNA聚合酶编码区序列设计PCR引物可检 测烟草株系（Tobaccostrain）、桃黄芽花叶株系（Peachyellowbudmosaicstrain）、葡萄黄脉株系（Grape yellowveinstrain)及多个ToRSV分离物。 4仪器设备、用具及试剂 4.1仪器设备 酶联检测仪、天平（感量，1/10000g）、PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、隔离温室、组织捣碎 机、恒温水浴、低温冰箱等。 4.2用具 微量移液器（2.5μL、10μL、20μL、100μL、200μL、1000μL）、酶联板、研钵等。 1 SN/T 2670—2010 4.3试剂 酶联免疫吸附测定试剂（见附录B）、反转录聚合酶链式反应（RT-PCR)检测试剂（见附录C）。 5样品制备 5.1种子 抽样按照SN/T2122的规定执行。 将种子（重点挑取畸形、不成熟的种子）播于灭菌土中，于25℃生长并进行症状观察。待长出3片～ 4片叶后将表现症状的植株编号，未表现症状的植株分组（10株为1组）并编号。 5.2苗木 按SN/T2122规定抽样。 将苗木种植于隔离温室中，于25℃生长并进行症状观察。有症状的苗木单独检测。没有症状的分 组检测，分组方法同5.1。 6检测方法 6.1酶联免疫吸附测定 见附录B。 6.2RT-PCR检测 行业标准信息服务平 见附录C。 6.3免疫电镜检测 按照SN/T1860的规定执行。 6.4生物学测定 参见附录D。 7 结果判定 6.1、6.2和6.3中的两种方法检测结果为阳性，即可判定检出番茄环斑病毒。酶联测定为阳性后 RT-PCR或免疫电镜检测结果为阳性可判定检出番茄环斑病毒。必要时可进行生物学测定，并进行 复验。 8样品保存 8.1样品保存 经检验确定携带番茄环斑病毒的样品应在合适的条件下保存，种子保存在4℃，病株在一20℃或 者一80℃冰箱中保存，做好标记和登记工作。 2