SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2538—2010 进出口动物源性食品中二甲氧芒氨嘧啶、 三甲氧芒嘧啶和二甲氧甲基芒氨嘧啶 残留量的检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of sulfonamides potentiator residues in animal origin foodstuffs for import and export- LC-MS/MS method 准信息服务平台 2010-03-02发布 2010-09-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2538—2010 前言 本标准的附录 A、附录B、附录C和附录D均为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、重庆出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：李贤良、丁涛、张晓燕、王国民、张雷、章宇、张婧、曹淑瑞。 行业标准信息服务平台 SN/T2538—2010 进出口动物源性食品中二甲氧芒嘧啶 三甲氧苄氨嘧啶和二甲氧甲基芒氨嘧啶 残留量的检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了动物源性食品中二甲氧苄氨嘧啶（简称：DVD）、三甲氧苄氨嘧啶（简称：TMP）、二甲 氧甲基氨嘧啶（简称：OMP）三种磺胺类增效剂残留量的制样和液相色谱-质谱/质谱检测方法。 本标准适用于肌肉（猪肉、鸡肉）、内脏（猪肝、牛肾、鸡肝）、牛脂肪、鸡蛋、鱼肉、牛奶及蜂产品（蜂蜜 和王浆）中二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧芋氨嘧啶、二甲氧甲基芊氨嘧啶三种磺胺增效剂残留量的测定和 确证。 2方法提要 试样中的磺胺增效剂用三乙胺-乙腈混合提取液或三氯乙酸-乙腈溶液提取，提取液经反相阳离子 混合固相萃取柱净化、浓缩和脱脂后，用液相色谱-串联质谱仪测定和确证，外标法峰面积定量。 3试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水， 3.1三氯乙酸。 3.2浓氨水（28%）。 3.3 ，三乙胺。 3.4乙睛：色谱纯。 3.5 甲醇：色谱纯。 3.6 正已烷：色谱纯。 3.7 甲酸：色谱纯。 3.8甲酸铵：优级纯。 3.9无水硫酸钠：650℃灼烧4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。 3.10 乙睛饱和的正已烷：正已烷中加人乙睛饱和。 3. 11 0.2%甲酸溶液：取2mL甲酸，用水稀释至1000ml 5%氨水-甲醇溶液：取50mL浓氨水，用甲醇稀释至1000mL 3.12 3.13 乙腈-水溶液：取80mL水，用乙腈稀释至100mL。 3.14 10%三氯乙酸溶液：称取100g三氯乙酸，用水稀释至1000mL 3.15 三乙胺-乙睛混合提取液：取适量三乙胺和乙睛，按1十99（体积比）混合备用 3.16 610%三氯乙酸-乙腈混合提取液：移取适量10%三氯乙酸溶液（3.14）和乙睛按7+3（体积比）混 合备用。 3.17二甲氧苄氨嘧啶（Diaveridine，CAS号：5355-16-8，分子式：C13H16N,O2）标准品：纯度大于或等 于99.0%。 3.18 3三甲氧芊氨嘧啶（trimethoprim，CAS号：738-70-5，分子式：C14Hi8N4O;）标准品：纯度大于或等 于99.5%。 1 SN/T2538—2010 3.19 9二甲氧甲基芋氨嘧啶（ormetoprim，CAS号：6981-18-6，分子式：C14H18N4O2）标准品：纯度大于 或等于99.0%。 3.20空白样品提取液：用不含三甲氧苄氨嘧啶、二甲氧苄氨嘧啶、二甲氧甲基苄氨嘧啶残留的样品，按 照6.1、6.2制备空白样品提取液。 3.21标准储备液：准确称取适量三甲氧苄氨嘧啶、二甲氧苄氨嘧啶、二甲氧甲基芊氨嘧啶标准品，分别 用乙睛配制成浓度为100μg/mL的标准储备液。此溶液在0℃～4℃避光保存。 3.22标准工作溶液：除蜂王浆、蜂蜜和牛奶样品标准溶液用流动相起始比例溶液配制以外，其余样品 根据需要用空白样品提取液将标准储备液稀释成适当浓度的标准工作溶液。置于0℃～4℃避光 保存。 3.23 阳离子固相萃取柱：PCX，60mg，3mL，或相当者；使用前用3mL水和3mL甲醇活化。 3.240.22μm微孔滤膜，有机系。 4 仪器和设备 4.1高效液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI)。 4.2组织捣碎机。 4.3天平：感量为0.1mg和0.01g。 4.4均质器：10000r/min。 4.5 离心机：10000r/min。 4.6氮吹仪。 4.7 具塞塑料离心管：50mL。 5试样制备与保存 5.1试样制备 5.1.1牛奶 取代表性样品500g，混勾，均分成两份作为试样，分装人洁净的容器内，密闭并标明标记。 5.1.2肌肉、内脏和鱼等试样 取代表性样品500g，将其切碎后，依次用捣碎机将样品加工成浆状，混勾，分装人洁净的盛样袋内， 密封并标明标记。 5. 1.3蛋 取有代表性样品约500g，搅拌均匀后装人洁净容器内，密封并做好标识。 5.1.4蜂产品 取有代表性样品量500g，对无结晶的蜂蜜样品将其搅拌均匀；对王浆样品将其搅拌均匀。制备好 的试样均分成两份，分别装人样品瓶中，密封，并标明标记。 5.2试样的保存 王浆、肌肉、内脏和鱼等试样于一18℃冷冻保存；奶和蛋试样于0℃～4℃保存；蜂蜜试样于常温 下避光保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化 6测定步骤 6.1提取 6.1.1肌肉、内脏和鱼等试样 准确称取2g均匀试样（精确到0.01g）于干净50mL塑料离心管中，加人5g无水硫酸钠（3.9）， 混勾后加入10ml三乙胺-乙混合提取液（3.15），用均质器10000r/min均质2min，5000r/min离 心3min，将有机相转移至25mL容量瓶中，残渣再用10mL提取液（3.15）均质提取。离心合并有机 相，用提取液（3.15）定容至25mL，混匀后待净化 2