SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2497.22—2010 进出口危险化学品安全试验方法 第22部分：DNA的Tm值测定方法 Test method of import and export dangerous chemicals- Part 22:Determination of DNA Tm 行业标准信息服务平台 2010-09-16实施 2010-03-02发布 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2497.22—2010 前言 第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS）试验； 第2部分：空斑形成细胞（PFC)试验； 第3部分：大型泽繁殖试验； 第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验； 第5部分：睾丸细胞UDS试验； 第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验； 第7部分：小鼠耳肿胀试验； 第8部分：窝淋巴结试验； 第9部分：血清溶血素测定试验； 第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验； 第11部分：种系突变试验； 第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验； 第13部分：荧光原位杂交试验； 第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验； 第15部分：PCR-SSCP实验； 第16部分：Western-Blot实验； 第17部分：哺乳动物行为毒理学试验； 第18部分：DNA加合物的检测方法； 第19部分：NorthernBlot实验； 第20部分：Bradford法测定蛋白质含量； 第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验； 第22部分：DNA的Tm值测定方法； 第23部分：细胞器的分离实验方法； 第24部分：细胞免疫功能体外检测方法； 隹信息服务平 第25部分：体液免疫功能试验， 第26部分：巨噬细胞功能试验； 第27部分：流式细胞术检测调亡； 第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用； 第29部分：生化需氧量（BOD）测定。 本部分为SN/T2497系列标准的第22部分。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检 疫局。 本部分主要起草人：贾晓川、王利兵、吕刚、李晶、李学洋、陈春。 本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 1 SN/T2497.22—2010 进出口危险化学品安全试验方法 第22部分：DNA的Tm值测定方法 1范围 SN/T2497的本部分规定了进出口危险化学品安全试验中DNA的Tm值测定试验的试验样品、 溶液、试验步骤和试验结果。 本部分适用于进出口危险化学品安全试验中DNA的Tm值测定。 2原理 DNA在当温度升到一定的数值时，两条核昔酸单链之间的氢键开始逐渐被打开（DNA开始变性） 分离，从而使DNA溶液在紫外波长为260nm处吸收明显增加；当温度高达一定值时，DNA完全分离 成单链，此后继续升温，DNA溶液的紫外吸收也不再增加。DNA热变性时，紫外吸收增加达到最大值 一半时所对应的温度称为该DNA的热变性温度或熔解温度，即Tm值。 3试剂 3.1水 本标准所述试验方法中涉及到的水均为灭菌蒸馏水。 3.2氯化钠-柠檬酸三钠缓冲溶液（SSC) 取一定量的氯化钠和柠檬酸三钠用水溶解，使得溶液中氯化钠浓度为0.15M,柠檬酸三钠浓度为 0.015 M。 4试验步骤 4.1DNA浓度 用紫外分光光度计，在260nm处测定DNA样品吸光度值A，A×50μg/mL，计算得出DNA浓度。 4.2样品的配制 取DNA样品60μg.用SSC稀释至3mL(吸光度0.3~0.4) 4.3样品纯度 用紫外分光光度计，以SSC为参比溶液，分别测定样品25℃时260nm、280nm和230nm处的吸 光度值A，当1.75< <0.6时，表明样品纯度达到测定要求，可以进行Tm值 Az80 A 测定。 4.4测定 用带有程序升温装置的紫外分光光度计，以SSC为参比溶液，测定样品由25℃～99℃的吸光度A （75℃以后每升高1℃，记录一次吸光度值；一般25℃～75℃，吸光度变化不天；94℃以后吸光度不再 变化)。 5试验结果 以记录的温度和相应的吸光度绘制DNA热变性曲线（精确测量时须将吸光度乘以相对膨胀体积 V/V25，校正为25℃水溶液体积的吸光度），热变性曲线的中点对应的温度为Tm值。 SN/T 2497.22—2010 行业标准信息 中华人民共和国出入境检验检疫 行业标准 进出口危险化学品安全试验方法 第22部分：DNA的Tm值测定方法 SN/T 2497.22—2010 * 中国标准出版社出版 北京复兴门外三里河北街16号 V邮政编码：100045 网址www.spc.net.cn 电话：6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本880×1230 1/16 印张 0.5字数4千字 2010年6月第一版 2010年6月第一次印刷 印数1—1600 * SN/T 2497.22-2010 书号：155066·2-20955 定价14.00元