SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2497.262010 进出口危险化学品安全试验方法 第26部分：巨噬细胞功能试验 Test method of import and export dangerous chemicals- Part 26:Determination of macrophage function 行业标准信息服务平台 2010-03-02发布 2010-09-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2497.26—2010 前言 第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS）试验； 第2部分：空斑形成细胞（PFC)试验； 第3部分：大型泽繁殖试验； 第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验； 第5部分：睾丸细胞UDS试验； 第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验； 第7部分：小鼠耳肿胀试验； 第8部分：窝淋巴结试验； 第9部分：血清溶血素测定试验； 第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验； 第11部分：种系突变试验； 第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验； 第13部分：荧光原位杂交试验； 第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验； 第15部分：PCR-SSCP实验； 第16部分：Western-Blot实验； 第17部分：哺乳动物行为毒理学试验； 第18部分：DNA加合物的检测方法； 第19部分：NorthernBlot实验； 第20部分：Bradford法测定蛋白质含量； 第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验； 第22部分：DNA的Tm值测定方法； 第23部分：细胞器的分离实验方法； 第24部分：细胞免疫功能体外检测方法； 隹信息服务 第25部分：体液免疫功能试验， 第26部分：巨噬细胞功能试验； 第27部分：流式细胞术检测调亡； 第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用； 第29部分：生化需氧量（BOD）测定。 本部分为SN/T2497系列标准的第26部分。 本部分修改采用《免疫学实验技术》中的免疫毒理学研究方法，其有关技术内容与上述方法完全一 致，在部分文本格式上按GB/T1.1做了编辑性修改。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国湖南出人境检验检 疫局。 本部分主要起草人：李晶、王利兵、王华、冯智劫、于智睿、李学洋 本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 1 SN/T2497.26—2010 进出口危险化学品安全试验方法 第26部分：巨噬细胞功能试验 1范围 SN/T2497.26的本部分规定了进出口危险化学品安全试验中巨噬细胞功能试验的试验原理、试 验方法和试验结果。 本部分适用于检测进出口危险化学品的免疫毒性的巨噬细胞功能试验。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过SN/T2497.26的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用 成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本 部分。 GB14924.1实验动物配合饲料通用质量标准 GB14925实验动物环境及设施 3试验原理 巨噬细胞作为单核吞噬细胞系统的主要细胞，具有活跃的吞噬功能。能清除体内抗原物质及变性 的细胞，在特异性及非特异性免疫中均起重要作用。巨噬细胞受抗原刺激后活化，可使其吞噬功能明显 增强。 4试验方法 4.1试验动物 BALB/C小鼠、ICR、昆明品系小鼠，雌或雄，20g～22g。试验动物饲养条件应符合GB14924.1和 GB14925的有关规定。 4.2试剂 4.2.1白色念珠菌悬液：接种于沙氏培养基的白色念珠菌，28℃培养18h～24h，生理盐水洗，配成 信息服务平 1×10°个/mL细胞悬液。 4.2.26%无菌淀粉。 4.2.3Hanks液（含5%小牛血清）。 4.2.40.03%美兰（4℃存放）。 4.3试验步骤 4.3.1体内法 试验前3天，小白鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1mL，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。试验时，每只小 鼠腹腔注射白色念珠菌菌液1mL，轻揉腹部，使菌液在腹腔中分布均匀，利于吞噬。30min后，将小鼠 拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用接种环取出腹腔液，均匀涂布于载玻片上，然后再滴一小滴 0.03%冷美兰，盖上盖玻片。高倍镜下进行观察，计数 4.3.2体外法 将6%的消毒淀粉液1mL注人小鼠腹腔。72h后，拉颈处死小鼠，腹，吸取腹腔液，1000r/min SN/T 2497.26—2010 离心5min，收集巨噬细胞。以Hank's液洗涤，1000r/min离心5min，重复二次。计数巨噬细胞，以 Hanks液配制1X10°个/mL细胞悬液。取华氏管，加人等量的1×10°个/mL的巨噬细胞悬液及1X 10?个/mL白色念珠菌菌液。37℃，温育30min（中间摇动试管二次）。500r/min离心5min，弃上清 液。轻轻振荡试管，取悬液一滴加至载玻片，取冷美兰一滴，混匀后，加盖玻片。高倍镜观察并计数。 5试验结果 按式（1）、式（2）、式（3）计算评价巨噬细胞的吞噬功能： ..(1) 100 ........(2) 100（发生吞噬的巨噬细胞数） .......(3) 被吞人的白色念珠菌数 注：杀死的细菌皇蓝色，活菌不着色。 行业标准信息服务平台