SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2533—2010 进出口化妆品中糖皮质激素类与 孕激素类检测方法 Determination of corticosteroids and progesterones in cosmetics for import and export 行业标准信息服务平台 2010-03-02发布 2010-09-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2533—2010 前言 本标准的附录A、附录B、附录C和附录D均为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国河南出人境检验检疫局负责起草。 本标准主要起草人：杨冀州、袁萍、刘亚风、祝伟霞、郭俊峰、魏蔚。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 SN/T 2533—2010 进出口化妆品中糖皮质激素类与 孕激素类检测方法 1范围 本标准规定了化妆品中曲安西龙、泼尼松龙、氢化可的松、甲泼尼松龙、倍他米松、地塞米松、氟米 松、曲安奈德、氟氢松、醋酸氢化可的松、醋酸氟氢可的松、醋酸泼尼松、醋酸可的松、醋酸地塞米松、哈西 奈德、17α-羟基醋酸去氧皮质酮、丙酸倍氯米松等17种糖皮质激素类药物和炔诺酮、孕酮、甲烯雌醇醋 酸酯、甲炔诺酮、地屈孕酮、醋酸羟孕酮、醋酸甲地孕酮、米非司酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲羟孕酮、己酸羟 孕酮等11种孕激素类药物含量检测的液相色谱-质谱/质谱（LC-MS/MS）和液相色谱法（LC）检测 方法。 本标准适用于膏状、乳状、水状化妆品中17种糖皮质激素和11种孕激素含量检测的液相色谱方法 和液相色谱-质谱/质谱确证方法。 本标准的液相色谱-质谱/质谱法为仲裁法。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所 研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 3试样的制备与保存 混匀所取样品，均分成两份作为试样，分别装人洁净容器，密封并做好标识。 方法一 液相色谱-质谱/质谱法 4方法提要 化妆品中糖皮质激素、孕激素采用乙睛超声提取，吹干浓缩后经固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/ 信息服务平台 质谱检测和确证，外标法定量， 5试剂和材料 除特殊注明外，水为GB/T6682规定的一级水。 5.1甲醇：高效液相色谱级。 5.2乙睛：高效液相色谱级。 5.3乙酸胺：高效液相色谱级。 5.4甲醇-水（30+70.体积比）溶液：量取30mL甲醇与70mL水混合。 5.510mmol/L乙酸胺溶液：称取0.77g乙酸胺（5.3），用水溶解并定容至1000mL 5.6乙腈-10mmol/L乙酸胺溶液（70+30，体积比）：量取70mL乙腈与30mL10mmol/L乙酸胺溶 液（5.5）混合。 5.7标准品：标准品名称及CAS号参见附录A中表A.1，纯度大于等于99%。 1 SN/T2533—2010 5.8标准储备溶液：分别称取糖皮质激素、孕激素类标准品各0.010g（5.7），用甲醇溶解并定容至 100mL，浓度相当于100μg/mL，该标准储备液贮存于一18℃以下，可稳定3个月。 5.9标准中间溶液：准确移取1.0mL标准贮备溶液（5.8），用甲醇定容至100mL，浓度相当于 1.0μg/mL，该溶液贮存于0℃~4℃，可稳定1个月。 5.10标准工作溶液：根据需要用本标准规定操作方法制得空白样品提取液，将标准中间溶液（5.9）稀 释成适当浓度的标准工作溶液，该工作溶液应使用前配制。 5.11固相萃取柱：OasisHLB(60mg/3mL，）或相当者。使用前依次用3mL甲醇，3mL水预处理， 保持柱体湿润。 5.120.22μm微孔滤膜：有机相。 6仪器和设备 6.1液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。 6.2分析天平：感量0.1mg，0.01g。 6.3超声波提取仪：40℃。 6.4 冰箱：-18℃。 6.5 旋涡混匀器。 6.6 温控离心机：4000r/min，-10℃。 6.7 固相萃取装置。 6.8 氮气浓缩仪。 6.9 聚丙烯离心管：20mL，10mL。 7测定步骤 7.1样品提取 7.1.1膏状、乳状样品 准确称取1g均匀试样（精确到0.01g）于20mL聚丙烯离心管中，加入10mL乙睛，混匀后40℃ 超声提取20min，每隔5min取出晃动一次，超声后涡旋混匀3min，4000r/min离心5min，将上清液 转移至10mL聚丙烯离心管中，置于-18℃冰箱中冷冻30min，取出后立即于一10℃4000r/min离 心2min，上清液于50℃水浴中氮吹浓缩至干，用3mL甲醇-水（5.4)溶解残渣，待净化 7.1.2水状样品 准确称取1g均匀试样（精确到0.01g）于20mL聚丙烯离心管中，加人10mL乙腈，混匀后40℃ 超声提取20min，每隔5min取出晃动一次，超声后涡旋混匀3min，4000r/min离心5min，将上清液 转移至10mL聚丙烯离心管中，50℃水浴中氮吹浓缩至干，用3mL甲醇-水（5.4)溶解残渣，待净化 7.2净化 将样液转移至已活化过的固相萃取柱中（5.11），控制样液流速约1mL/min，待样液全部流出后， 依次用3mL水、3mL甲醇-水（5.4）淋洗，弃去全部流出液，15mmHg以下减压抽干5min，使柱体保 持干凋，用10mL甲醇洗脱，洗脱液于50℃水浴中氮吹浓缩至干，用1.0mL乙睛-乙酸胺混合溶液 （5.6）溶解残渣，经0.22um滤膜过滤，供液相色谱-质谱/质谱测定。 7.3测定 7.3.1液相色谱条件 7.3.1.1色谱柱：Cis，150mm×2.1mm（内径）,5μm，或相当者； 7.3.1.2柱温：25℃； 7.3.1.3进样量：10μL； 7.3.1.4流动相：乙腈-10mmol/L乙酸胺溶液，梯度洗脱程序见表1。 2