SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T2269—2009 进出口贝肉中大田软海绵酸的检测 液相色谱-串联质谱法 Determination of okadaic acid in shellfish meat for import and export- LC-MS/MS method 行业标准信息服务平台 2009-02-20发布 2009-09-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2269—2009 前 言 本标准的附录A、附录B均为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：方晓明、王敏、唐毅锋、王传现。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 SN/T 2269—2009 进出口贝肉中大田软海绵酸的检测 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了进出口贻贝和蛤中大田软海绵酸的制样和液相色谱-串联质谱检测方法。 本标准适用于进出口始贝和蛤中大田软海绵酸的检测。 2测定方法 2.1方法提要 试样中的大田软海绵酸用甲醇/水提取，再用三氯甲烷抽提，经Sep-paksilica固相萃取柱净化后， 用C1s柱色谱分离，选择电喷雾正离子模式质谱检测，外标法定量。 2.2试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为二次蒸留水或相适应的去离子水。 2.2.1乙睛：液相色谱级。 2.2.2甲醇。 2.2.3甲酸。 2.2.4正已烷。 2.2. 5 三氯甲烷。 2.2.6丙酮。 2.2.7 氮气：纯度>99.9%。 2.2.8 甲醇-水（80十20）。 2.2.9 正已烷-丙酮-水（20十80十0.3）。 2.2.10 甲醇-丙酮-水（3+97十0.3）。 2.2. 11 甲醇-丙酮-水（50+50+0.3）。 2.2. 12 0.1%甲酸水溶液（含2mmol/L乙酸铵）：1L水中加入1.0mL甲酸和0.156g乙酸铵 2.2.13 乙腈-0.1%甲酸水溶液（含2mmol/L乙酸铵）（30+70）。 2.2. 14 大田软海绵酸（Okadaicacid，C4HOCAS号：78111-17-8）标准物质：纯度大于等于98.0%。 2.2. 15 大田软海绵酸标准储备液：准确称取适量的大田软海绵酸标准品，用甲醇配制成10ug/mL的 标准储备液，于一18℃中可保存半年。根据需要可将储备液再稀释成适当浓度的中间溶液。 2.2.16大田软海绵酸基质标准工作溶液：根据需要吸取适量大田软海绵酸标准储备液或中间溶液 （2.2.15），用空白样品提取液稀释成适当浓度的基质标准工作溶液。基质标准工作溶液在一18℃保 存，可使用1周。 2.2.17Sep-paksilica柱：使用前小柱预先用10mL丙酮（含0.3%水）、10mL甲醇（含0.3%水）和 10mL正已烷-内酮-水（20+80+0.3）活化，流速为2mL/min。 2.3仪器和设备 2.3.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 2.3.2固相萃取装置。 2.3.3恒温氮吹装置。 2.3.4均质机。 SN/T 2269—2009 2.3.5旋涡混合器。 2.3.6离心机：最大转速4.000r/min。 2.3.7带刻度离心管：15mL。 2.3.80.45um有机相针式过滤膜。 2.4测定步骤 2.4.1样品制备 从抽取的原始样品中取可食部分，放入搅碎机中搅碎至匀浆状，均分成两份，装人清洁的容器内，作 为试样。密封，并标明标记。将试样于一18℃以下冷冻保存。 制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 2.4.2提取及净化 称取经捣碎成浆的试样约2g（精确至0.01g）于15mL离心管中，加4.0mL甲醇-水（2.2.8），超 声提取5min，于3500r/min离心10min，吸取上清液于另一15mL离心管中。残渣用4.0mL甲醇- 水（2.2.8）重复提取一次，合并上清液，最后用甲醇-水（3.2.8）定容至10.0mL。从定容的溶液中吸取 5.0mL于另一15mL离心管中，加人5mL正已烷，涡旋混匀，静置分层，弃去正已烷层。加人1mL水 和6mL三氯甲烷，涡旋混匀，静置分层，吸取水相（上层）于另一15mL离心管中，再加入6mL三氯甲 烷，涡旋混匀，静置分层，弃去上层水相，合并三氯甲烷提取液，收集于试管中，在60℃中用氮气吹干。 用1.0mL正已烷-丙酮-水（2.2.9）溶解上述残余物，经过活化的Sep-paksilica柱，分别用1mL正已 烷-丙酮-水（2.2.9和10mL甲醇-丙酮-水（2.2.10）淋洗，最后用10.0mL甲醇-丙酮-水（2.2.11)洗脱，收 集洗脱液于试管中，于45℃中用氮气吹干。残余物用1.0mL甲醇溶解，过0.45μm滤膜，滤液供测试。 2.4.3测定 2.4.3.1液相色谱参考条件 a) 色谱柱：Cis柱（150mm×2.1mm，粒径3.5μm），或相当者；Cis预柱（20mm×3.9mm，粒径 5μm），或相当者； b) 流动相：乙腈-0.1%甲酸水溶液（含2mmol/L乙酸铵）（70+30）； c) 流速：0.2mL/min； d) 柱温：22℃； e）进样量：10μL% 2.4.3.2液相色谱-串联质谱测定 根据试样中被测物含量情况，选定浓度相近的标准工作溶液，对标准工作溶液与样液等体积参插进 样测定，串联质谱参考条件参见附录A。标准工作液和样液中被测物的响应值均应在仪器检测线性范 围内。在上述色谱条件下，大田软海绵酸的保留时间约为4min，标准品色谱图和质谱图参见附录B图 B. 1 和图 B. 2 。 2.4.4空白试验 除不加试样外，均按上述操作步骤进行。 2.5结果计算和表述 2.5.1定性测定 进行样品测定时，如果检出的色谱峰保留时间与标准品的保留时间偏差在士2.5%之内，并且在扣 除背景后的样品谱图中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比，误 差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。 表1定性确证时相对离子丰度的最大允许误差 相对离子丰度/% >50 >20~50 >10~20 ≤10 允许的相对误差/% ±20 ± 25 ±30 ±50 2