SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2222—2008 进出口动物源性食品中糖皮质激素 类兽药残留量的检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of glucocorticosteroids residues in foodstuffs of animal origin for import and export-LC-MS/MS method 行业标准信息服务平台 2008-11-18发布 2009-06-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2222—2008 前言 本标准的附录A为规范性附录，附录B和附录C为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中华人民共和国浙江出人境检验检疫局、中国检 验检疫科学研究院、中华人民共和国黑龙江出人境检验检疫局负责起草 本标准主要起草人：林维宣、谢文、康庆贺、孙兴权、肖珊珊、田苗、奚君阳、于灵。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 SN/T 2222—2008 进出口动物源性食品中糖皮质激素 类兽药残留量的检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了进出口动物源性食品中曲安西龙、泼尼松龙、氢化可的松、泼尼松、地塞米松、氟米松、 曲安奈德残留量测定液相色谱-质谱/质谱检测方法。 本标准适用于猪肉、猪肾中糖皮质激素类兽药残留量的检测和确证。 2方法提要 样品先加入醋酸铵缓冲溶液和β-盐酸葡萄糖醛式酶-芳基硫酸酯酶水解，再用乙酸乙酯提取，提取 液经HLB固相萃取小柱净化，液相色谱-质谱/质谱测定和确证，外标法定量。 3试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸留水 3.1乙睛：高效液相色谱级。 3.2正已烷：高效液相色谱级。 3.3乙酸乙酯：高效液相色谱级。 3.4甲醇：高效液相色谱级。 3.5乙酸铵。 3.6冰乙酸。 3.7无水硫酸钠：650℃灼烧4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用 3.8β-盐酸葡萄糖醛武酶-芳基硫酸酯酶：含β-盐酸葡萄糖醛武酶134600U/mL，芳基硫酸酯酶 5200U/mL。 3.9甲醇-水（3+7，体积比）30mL甲醇与70mL水混合。甲醇-水（1+1.体积比）。 3.10甲醇-水（5+5.体积比）：50mL甲醇与50mL水混合。 3.110.02mol/L醋酸铵缓冲溶液：溶解154g醋酸铵于950ml水中，用冰乙酸调节溶液pH值到 5.2,最后用水稀释至1L。 3.12标准品纯度大于等于97%。标准品信息见附录A表A.1 3.13糖皮质激素标准储备溶液：称取适量标准品（3.12）用甲醇溶解配制成浓度为100ug/mL的标 准储备溶液，一18℃冷冻保存，有效期3个月。 3.14标准工作溶液：根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成地塞米松溶液浓度分别为1、2、4、 6和8ng/mL，泼尼松龙的溶液浓度（猪肉）分别为6、8、16、24和40ng/mL曲安西龙、氢化可的松、泼 尼松、氟米松、曲安奈德混合溶液浓度分别为10、20、40、80和100ng/mL。临用前现配。 3.15无水硫酸钠柱：80mmX40mm（内径）筒形漏斗，底部垫5mm脱脂棉，再装40mm无水硫酸钠。 3.16固相萃取柱：Oasis(HLB)500mg，或相当者。 3.17有机相微孔滤膜：0.45μm。 4仪器和设备 4.1高效液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源。 1 SN/T 2222—2008 4.2 旋转蒸发器。 4. 3 粉碎机。 4. 4 均质器。 4.5 旋涡混合器。 4. 6 离心机：7000r/min。 4.7 氮吹仪。 4.8 天平：感量为0.01g和0.0001g。 4.9 固相萃取装置。 恒温箱。 4.10 5 试样制备与保存 从所取全部样品中取出有代表性样品约500g，用粉碎机粉碎，混合均匀，均分成两份，分别装入洁 净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样于一18℃冷冻保存。 在抽样和制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。 6测定步骤 6.1提取 称取5g试样（精确到0.01g）置于50mL具塞塑料离心管中，加1.5mL甲醇，再加人23.5mL醋酸 铵缓冲溶液（3.11)和40μLβ-盐酸葡萄糖醛武酶-芳基硫酸酯酶（3.8）,以2000r/min混匀1min，于恒温箱 混匀1min，以4000r/min离心5min，将上层乙酸乙酯提取液过无水硫酸钠柱，滤液收集于浓缩瓶中，样 6.2净化 OasisHLB柱（3.16)使用前依次用5mL甲醇和5mL水预洗。用5mL醋酸铵缓冲溶液（3.11)溶 解残渣，将溶液转移至OasisHLB柱，弃去流出液，用5mL水和5mL甲醇水溶液（3.9)依次洗涤，弃去 流出液，负压抽干，8mL甲醇洗脱，收集全部洗脱液，在50℃以下水浴减压浓缩至近干，用1.0mL甲 醇-水（3.10）定容，混勺，将溶液通过0.45μm滤膜，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。 6.3测定 6.3.1液相色谱-质谱/质谱条件 a) 色谱柱：Cg柱，150mmX4.6mm（内径）,5μm或相当者； 流动相：乙-水，梯度见表1； 表 1梯度洗脱程序 时间/min 乙腈/% 水/% 20 80 8 50 50 15 50 50 18.5 60 40 40 20 60 21 25 90 10 25.5 20 80 28.5 20 80 2