SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 21352008 蜂蜜中转基因成分检测方法 普通PCR方法和实时荧光PCR方法 Detection of genetically modified components in honey- Contentional PCR and real-time fluorescence PCR 行业标准信息服务平台 2009-03-16实施 2008-09-04发布 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2135—2008 前言 本标准的附录A和附录B均为规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局起草。 本标准主要起草人：饶红、冯骞、陈广全、付浦博、曾静、汪琦、张惠媛 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 SN/T2135—2008 蜂蜜中转基因成分检测方法 普通PCR方法和实时荧光PCR方法 1范围 本标准规定了蜂蜜中转基因成分的定性检测方法 本标准中适用于以转基因棉花、转基因油菜等作为蜜源植物采集的蜂蜜或受到转基因作物污染的 蜂蜜中的转基因成分的检测。 2规范化引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，ISO3696：1987，MOD） SN/T1193基因分析检测实验室技术要求 SN/T1194植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法 3术语、定义和缩略语 3.1术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1. 1 聚合酶链式反应polymerasechainreaction，PCR 体外酶催合成特异DNA片段的方法，模板基因序列先经高温变性成为单链，在DNA聚合酶作用 和适宜的反应条件下，根据模板序列设计的两条引物分别与模板DNA两条链上相应的一段互补序列 发生退火而相互结合，接着在DNA聚合酶的作用下以四种脱氧核糖（dNTP)为底物，使引物得以延伸， 然后不断重复变性、退火和延伸这一循环，使欲扩增的基因片段以几何倍数扩增。 3. 1. 2 实时荧光PCRreal-timefluorescence PCR 对未知模板进行定性或定量分析的方法。PCR扩增时在加人一对引物的同时加入一个特异性的荧光 探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光集团和一个淬灭荧光集团。探针完整时，报告 基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的53°外切酶活性将探针酶切降解，使报 告荧光集团和率灭荧光基团分离，从而荧光检测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有 一个荧光分子形成，实现了荧光信号的积累与PCR产物形成完全同步。就是通过对PCR扩增反应中 每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量PCR 反应中，引人了一种荧光化学物质，随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等 比例增加。每经过一个循环，收集一次荧光强度信号，这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变 化，从而得到一条荧光扩增曲线图。 3.1.3 定性检测 qualitativedetection 对样品中转基因成分进行检测，以判定该样品是否为转基因产品。 1 SN/T2135—2008 3.2缩略语 3.2.1下列缩略语适用于本标准。 GMO genetically modified organism 转基因生物。 3.2.2 CaMV 35S 35S promoter from Cauliflower.mosaic virus 花椰菜花叶病毒35S启动子。 3.2.3NOS terminator of nopaline synthase gene fromAgrobacterium tumefaciens 来源于农杆菌的胭脂碱合成酶基因终止子。 3.2.4CP4 EPSPS5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase gene 5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因。 3.2.5 IVR Invertase 1 gene from maize 玉米转化酶1基因。 3.2.6 NptlI neomycin-3'-phosphotransferase gene 新霉素-3'-磷酸转移酶基因。 3.2.7 CrylA(b):a synthetic gene encoded the first 648 amino acids,insecticidal-active truncated product identical to that of crylA(b) gene of Bacillus thuringiensis subsp. Kurstaki steain HD-1 苏云金芽孢杆菌结晶蛋白CryIA（b)型毒素抗虫基因。 3.2.8 PAT phosphinothricin acetyltransferase gene 草丁膦乙酰转移酶基因。 3.2.9BARNASE ribonuclease gene fromBacillus amyloliquefaciens 来源于杆菌Bacillusamyloliquefaciens的ribonuclease基因。 3.2.10 BARSTAR specific inhibitor of the barnase gene from Bacillus amyloliquefaciens 来源于杆菌Bacillusamyloliquefaciens的barnase基因的特异抑制基因。 3.2.11 PEP phosphoenilpyruvate-carboxylase 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因。 3.2. 12 FMV 35s 35Spromoter from a modified figwort mosaic virus(caulimovirus group) 玄参花叶病毒35S启动子。 3.2. 13 BAR phosphinothricin acetyltransforase gene 抗除草剂基因（Bar)。 3. 2. 14 CryIA(b)-CrylA(c) insecticidal-active ftruncated product identical to that of cryIA(b)-cry IA(c) gene of Bacillus thuringiensis subsp 苏云金芽孢杆菌结晶蛋白（Cry）I型毒素抗虫融合基因。 3.2. 15 GOX glyphosate oxidoreductase gene 草甘麟氧化还原酶基因。 3.2. 16 CrylA(c) insecticidal-active firuncated product identical to that of crylA(c) gene of Bacil lus thuringiensis subsp 苏云金芽孢杆菌结晶蛋白CryIA（c）型毒素抗虫基因 4原理 蜂蜜中转基因成分检测是利用外源基因与植物本身基因的不同，通过设计只能扩增外源基因中 DNA片段的引物和进行PCR扩增，根据实验结果，判定该蜂蜜是否带有植物外源基因成分，从而判断 蜂蜜中是否含有转基因成分。实时荧光PCR检测是在常规PCR基础上加人荧光标记探针来实现核酸 定量，由于荧光探针在PCR反应时被切割的数量与PCR原始模板量成正相关，因此，可以通过检测荧 2