SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2099—2008 进出口食品中绿脓杆菌检测方法 Determination of Pseudomonas aeruginosa in food for import and export 行业标准信息服务平台 2009-02-01实施 2008-07-17发布 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2099—2008 前言 本标准的附录A、附录B均为规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：郑晶、黄晓蓉、赵贵明、翁国柱、吴芸芸、郑麟毅、陈彬、邵碧英。 本标准系首次发布的出入境检验检疫标准。 行业标准信息服务平台 SN/T2099—2008 进出口食品中绿脓杆菌检测方法 1范围 本标准规定了食品中绿脓杆菌的定性和定量检测方法。 本标准适用于各类食品中的绿脓杆菌检测，可参考此法检测水的绿脓杆菌 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T4789.28一2003食品微生物学检验染色法、培养基和试剂 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 绿脓杆菌属假单胞菌属（pseudomonas） 亦名为铜绿假单胞菌，具荚膜鞭毛，为无芽胞的革兰氏阴性杆菌，能分解蛋白质，发酵糖类能力较低， 能产生两种水溶性色素：一种是绿脓菌素，为蓝绿色的吩嗪类化合物，无荧光性，另一种为荧光素，呈绿色。 4设备和材料 4.1恒温培养箱：36℃±1℃、42℃。 4.2 显微镜：带油镜头。 4.3均质器。 4. 4 高压灭菌器。 4.5 天平：精度0.1g。 4. 6 VITEK全自动微生物鉴定系统或类似设备。 注：VITEK是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示 对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 4.7吸管：1mL，分刻度0.1mL;10mL，分刻度1mL。 4. 8 3可调移液器：10μL~100μL,100μL~1000μL。 4.9试管：15mmX100mm 4.10 0灭菌平血：直径90mm，底部平整的玻璃或一次性塑料灭菌平皿。 4.11灭菌的样品处理器具：镊子、剪刀、勺子。 4.12 2质控菌株：绿脓杆菌标准菌株ATCC9027，恶臭假单胞菌ATCC49128或其他经过验证的具有 相同生物学特征的同类菌株。 5培养基和试剂 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T6682的规定。 5.1SCDLP增菌液：见第A.1章。 5.2磷酸盐缓冲稀释液：见第A.2章。 SN/T 2099—2008 5.3 假单胞菌CFC选择性培养基：见第A3章。 5. 4 假单胞菌CN选择性培养基：见第A.4章。 5.5 氧化酶试验：按GB/T4789.28—2003中3.18规定。 5.6 乙酰胺培养基：见第A.5章。 5.7 葡萄糖酸盐培养基：见第A，6章。 5.8 精氨酸双水解酶培养基：见第A，7章 5.9 硝酸盐蛋白陈水培养基：见第A.8章。 5. 10 明胶培养基：见第A.9章。 5.11 赖氨酸脱羧酶培养基；见第A.10章。 5. 12 营养琼脂：见第A.11章。 5.13 API20NE测试条。 5. 14 GNI+测试卡。 注：API20NE测试条和GNI+测试卡是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便 本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 6检验程序 6.1方法提要 食品中绿脓杆菌的检验方法是通过选择性增菌、分离、生化鉴定等方法对食品中可能存在的绿脓杆 菌进行定性和定量的检验。 6.2检验程序 绿脓杆菌的检验程序见图1。 样品25g（25mL） 225mL灭菌生理盐水(DW）或磷酸盐缓冲稀释液 225mLSCDLP增菌液 36℃±I℃ 24h±2h 1mL转种10mLSCDLP增菌肉汤3×3管 行业标 36℃±1℃24h±2h 接种CFC和CN平板 36℃±1℃24h±2h 挑选可疑菌落，接种营养琼脂斜面 36℃±1℃18h~24h 草兰氏染色、氧化酶试验 API20NE、GNI鉴定 萄糖 双 还原 酸 报告结果 报告结果 图1绿脓杆菌检验程序示意图