SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T2051—2008 食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分 检测方法 实时PCR法 Determination of bovine, ovine, porcine-derived materials in food,cosmetic and feedReal-time PCR method 行业标准信息服务平台 2008-04-29发布 2008-11-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2051—2008 前 言 本标准的附录F为规范性附录，附录A、附录B、附录C、附录D、附录E为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、宝生物工程（大连）有限公司、中国检验 检疫科学研究院。 本标准主要起草人：曹际娟、李晶泉、郑秋月、于爱丽、陈颖、姚珊、谢琰。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 SN/T 2051—2008 食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分 检测方法实时PCR法 1范围 本标准规定了食品、化妆品和饲料中牛、羊（绵羊和山羊）、猪源性成分实时PCR检测方法。 本标准适用于食品、化妆品和饲料中牛、羊（绵羊和山羊）、猪源性成分的鉴别检测 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987） GB19489实验室生物安全通用要求 3术语和定义、缩略语 下列术语和定义、缩略语适用于本标准。 3.1术语和定义 3. 1. 1 牛源性成分 bovine-derived materials 牛种属特异性DNA片段。 3. 1.2 羊源性成分ovine-derivedmaterials 羊种属特异性DNA片段。 3.1.3 猪源性成分porcine-derivedmaterials 尔准 猪种属特异性 DNA片段。 3. 1. 4 实时荧光PCR 实时荧光聚合酶链式反应。 3.1.5 Ct 值Cycle threshold Ct 每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数 3.2缩略语 3.2. 1 DNAdeoxyribonuleic acid 脱氧核糖核酸。 3.2.2 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链式反应。 1 SN/T2051—2008 3.2.3 Taq Thermus aquaticu 水生栖热菌。 3.2. 4 FAM 6-carboxyfluorescein 6-羧基荧光素。 3.2.5 ROx5-carboxy-X-rhodamine 6-羧基-X-罗丹明。 3.2.6 HEx 5-hexachloro-fluorescein 6-羧基-2°，4，4"，5",7,7'-六氯荧光素。 3.2.7 COX ICytochrome C oxidase subunit I 细胞色素C氧化酶亚单位I 4原理 本标准采用TaqMan实时荧光PCR技术，根据线粒体DNA（COXI）基因上动物种间多态性的差 异而进行动物源性种类鉴定。本标准应用多色荧光检测技术，采用多重PCR方法。牛、羊、猪源性成分 单体系检测时，对反应液中含有的两种不同荧光染料进行双通道同步检测，在同一反应管内对牛或羊或 猪的COXI基因及内参照反应同时进行扩增，并通过标记两种不同荧光物质（FAM、HEX)的特异性 探针进行特异性杂交，两色荧光同步检测：牛羊源性成分混合体系检测时，对反应液中含有的三种不同 荧光染料进行三通道同步检测，在同一反应管内分别对牛，羊特异的COXI基因及内参照（Internal Control)同时进行扩增，并通过标记三种不同荧光物质（FAM、HEX、ROX)的特异性探针进行特异性杂 交，多色荧光同步检测。其中，对内参照反应的检测，可以监控反应是否正常进行，防止假阴性结果。 5材料与试剂 5.1设备和材料 5. 1. 1 实时荧光PCR检测系统。 5. 1. 2 高速台式冷冻离心机（最高转速12000r/min以上）。 5. 1. 3 台式离心机（最高转速20001/min）。 5. 1. 4 振荡器。 5.1.5 冰箱（2℃～8℃和-20℃或-80℃）。 5.1. 6 5.1.7 实时荧光PCR反应管。 5.1.8 离心管。 5. 1.9 水浴槽。 5. 1. 10 加热器。 5. 1. 11 可移动紫外灯。 5.1.12 磁力架。 5.2试剂 除特别说明以外，所用试剂均为分析纯，水为按照GB/T6682规定的一级水。所有试剂均用无 DNA酶污染的容器分装。