SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2063—2008 进出口蜂王浆中氯霉素 残留量的检测方法 液相色谱串联质谱法 Determination of chloramphenicol residue in royal jelly for import and export-LC-MS/MS 行业标准信息服务平台 2008-04-29发布 2008-11-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2063—2008 前言 本标准的附录A和附录B均为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：谢文、丁慧瑛、钱艳、奚君阳、陈笑梅、黄雷芳。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 SN/T 2063—2008 进出口蜂王浆中氯霉素 残留量的检测方法 液相色谱串联质谱法 1范围 本标准适用于蜂王浆中氯霉素残留量的检测。 2方法提要 样品用甲醇沉淀蛋白质，再用乙酸乙酯提取，经硅胶和OasisHLB固相萃取小柱净化，液相色谱串 联质谱测定和确证，同位素内标法定量。 3试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。 3.1乙酸乙酯：高效液相色谱级。 3.2甲醇：高效液相色谱级。 3.3甲苯：高效液相色谱级。 3.4氯化钠。 3.5无水硫酸钠：650℃灼烧4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用 3.6甲醇水溶液：甲醇-水（2十8，体积比）。 3.7甲苯-乙睛（9十1，体积比）。 3.8甲苯-乙睛（4十6，体积比）。 3.9氯霉素标准品（chloramphenicol,CASNO.56-75-7，CiiH2Cl2N2O）：纯度大于等于99%。 3.10 氯霉素-d5标准品：纯度大于等于99%。 3.11氯霉素标准储备溶液：称取适量标准品（3.9），用甲醇溶解，溶液浓度为100μg/mL。1℃~4℃冷 藏保存。有效期6个月。 3.12氯霉素-d5标准储备溶液：称取适量标准品（3.10），用甲醇溶解，溶液浓度为100μg/mL，1℃～ 4℃冷藏保存。有效期6个月。 3.13标准工作溶液：根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成0.04ng/mL、0.12ng/mL、 0.24ng/mL、0.32ng/mL、0.64ng/mL的标准工作溶液.相当于样品中含有0.1μg/kg、0.3μg/kg、 0.6μg/kg、0.8μg/kg、1.6μg/kg氯霉素，同位素内标氯霉素-d5浓度均为0.25ng/mL。 3.14无水硫酸钠柱：80mm×40mm（内径）筒形漏斗，底部垫5mm脱脂棉，再装40mm无水硫酸钠。 3.15硅胶固相萃取柱：500mg或相当者，使用前用10mL甲苯-乙睛（9+1，体积比）预洗。 3.16 6OasisHLB固相萃取柱：500mg，或相当者，使用前用甲醇7mL和水10mL预洗。 4仪器和设备 4.1高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 4.2旋转蒸发器。 4.3旋涡混合器。 SN/T 2063—2008 4.4 固相萃取装置。 4.5高速离心机：7000r/min。 4.6氮吹仪。 5试样制备与保存 取500g代表性蜂王浆样品，在室温下解冻，等样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分别装入 样品瓶中，密封，并标明标记。一份作为试验样，另一份在一18℃保存。 在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。 6测定步骤 6.1提取 称取4g试样（精确到0.01g）置于50mL具塞离心管中，准确加人0.5mL氯霉素-d5（5ng/mL） 内标溶液和15mL水，混匀，静置5min，加甲醇至30.0mL，于旋涡混合器上以2000r/min，混匀 1min，以6000r/min离心5min，移取15.0mL上层液置于另一个50mL具塞离心管中，加入2g氯化 钠和20mL乙酸乙酯，于旋涡混合器上以2000r/min，混匀1min，以4000r/min离心5min，将上层 乙酸乙酯过无水硫酸钠柱（3.14)收集于浓缩瓶中，再加入20mL乙酸乙酯，重复上述操作，合并乙酸乙 酯提取液，再用5mL乙酸乙酯洗涤无水硫酸钠柱，在40℃以下水浴减压浓缩至近干。 6.2净化 用10mL乙睛-甲苯（1+9.体积比）溶液溶解残渣，将溶解液分次转移至硅胶净化柱（3.15)中，弃去 流出液，用6mL乙睛-甲苯（6十4，体积比）洗脱，在50℃以下水浴下平缓氮气吹干，加人5mL水溶解残 渣，将溶液转移至OasisHLB柱（3.16）中，再用10mL水和5mL甲醇水溶液（3.6）依次洗涤离心管，洗 涤液过固相萃取小柱，弃去流出液。在负压下减压抽干，最后用5mL甲醇洗脱，控制流速1mL/min~ 2mL/min，收集全部洗脱液于10mL离心管中，洗脱液在50℃以下水浴下平缓氮气吹至约2.5mL，用 水定容至5.0mL，混匀，将溶液通过0.45um滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。 6.3测定 6.3.1 液相色谱串联质谱条件 a) 色谱柱：Cg柱.5μm，150mm×4.6mm（内径）或相当者； 流动相见表1； 表1# 流动相梯度洗脱 时间/min 水/% 甲醇/% 0 35 65 4 CL 25 5. 9 75 25 6 35 65 8 35 65 流速：400μL/min; c) d) 进样量：20μL； e) 离子源：电喷雾离子源； f) 扫描方式：负离子扫描； 检测方式：多反应监测； g) h) 雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各参数使质谱灵敏度达到检测 要求，参考条件参见附录A； 2