SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2062—2008 进出口蜂王浆中大环内酯类抗生素残留 量的检测方法 液相色谱串联质谱法 Determination of macrolide antibiotics residues in royal jelly for import and exportLC-MS/MS method 行业标准信息服务平台 2008-04-29发布 2008-11-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2062—2008 前言 本标准的附录A、附录B和附录C均为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：谢文、丁慧瑛、奚君阳、钱艳、陈笑梅、黄雷芳。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 SN/T 2062—2008 进出口蜂王浆中大环内酯类抗生素残留 量的检测方法液相色谱串联质谱法 1范围 本标准规定了蜂王浆中螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素、泰乐菌素、红霉素、罗红霉素、交沙霉素残留 量的制样和液相色谱串联质谱测定方法。 本标准适用于蜂王浆中螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素、泰乐菌素、红霉素、罗红霉素、交沙霉素残留 量的检测。 2方法提要 质谱测定，外标法定量。 3试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏留水 3.1乙睛：高效液相色谱级。 3.2甲醇：高效液相色谱级。 3.3甲酸：高效液相色谱级。 3.4氢氧化钠。 3.5磷酸二氢钠。 3.60.1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g氢氧化钠，并用水稀释至1L。 3.7甲醇水溶液：甲醇-水（2十8，体积比）。 pH值到8.0,最后用水稀释至1L。 3.9螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素磷酸盐、泰乐菌素酒石酸盐、红霉素、罗红霉素、交沙霉素标准品：纯 度大于等于95%，参见附录A表A.1 1℃～4℃冰箱保存。有效期三个月。 3.11标准工作溶液：根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成2.5ng/mL、5ng/mL10ng/mL、 50ng/ml、100ng/ml的混合标准工作溶液，相当于样品中含有5uμg/kg、10uμg/kg、20uμg/kg、 100μg/kg、200μg/kg大环内酯。 2Cis固相萃取小柱，500mg或相当者，使用前依次用5mL甲醇，5mL水预洗。 3.12 4仪器和设备 4.1高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 4.2旋转蒸发器 4.3固相萃取装置。 4.4高速离心机：7.000r/min。 4.5 pH计。 1 SN/T 2062—2008 4.6旋涡混合器。 4.7氮吹仪。 5试样制备与保存 取500g代表性蜂王浆样品，在室温下解冻，等样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分别装人 样品瓶中，密封，并标明标记。一份作为试验样，另一份在一18℃保存。 在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。 6测定步骤 6.1提取 称取2g试样（精确到0.01g）置于50mL具塞离心管中，加5mL水，混匀，静置5min，再加甲醇至 10.0mL，于旋涡混合器上以2000r/min混匀1min，于6000r/min离心5min，过滤，移取5.0mL滤 液，加15mL磷酸盐缓冲溶液（3.8)稀释，混匀。 6.2净化 将溶液转移至固相萃取小柱中（3.12），再用5mL水和5mL甲醇水溶液（3.7）依次洗涤浓缩瓶，洗 涤液过固相萃取小柱，弃去流出液，在负压下抽干，用6mL甲醇洗脱，控制流速1mL/min～2mL/min， 收集全部洗脱液于10mL离心管中，洗脱液在50℃以下水浴下平缓氮气吹至约1mL，用水定容至 2.0mL，混匀，溶液过0.45μm，滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。 6.3测定 6.3.1液相色谱-串联质谱条件 色谱柱：Cs柱，5μm，150mmX4.6mm（内径）或相当者： a) b) 流动相梯度洗脱程序（见表1）； 表1梯度洗脱程序 时间/min 乙腈/% 0.15%甲酸水溶液/% 0 20 80 2 20 80 7. 5 80 20 7. 6 95 5 8.7 95 5 8.8 20 80 侣息服务平 14 80 c) 流速：400μL/min； d) 进样量：20uL； e) 离子源：电喷雾离子源； f) 扫描方式：正离子扫描： g) 检测方式：多反应监测： 雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各参数使质谱灵敏度达到检测 要求，参考条件参见附录B表B.1； 监测离子对（m/z）：螺旋霉素843.6/174.3（定量离子）、843.6/318.5；替米考星869.7/174.4 （定量离子）、869.7/156.6；竹桃霉素688.6/158.4（定量离子）、688.6/544.6；泰乐菌素916.5 174.2（定量离子）、916.5/772.7；红霉素734.6/158.5（定量离子）、734.6/576.5；罗红霉素 837.6/158.4（定量离子）、837.6/679.6；交沙霉素828.8/174.3（定量离子）828.8/229.3。 2