SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2061—2008 进出口蜂王浆中硝基呋喃 类代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of nitrofuran metabolites residues in royal jelly for import and export- 业标准信息服务平台 HPLC-MS/MS 2008-04-29发布 2008-11-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2061—2008 前 言 本标准的附录A、附录B为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：陈笑梅、刘海山、谢文、单慧君、俞春燕、杨磊、钱艳、吴娟。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 SN/T 2061—2008 进出口蜂王浆中硝基呋喃 类代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了蜂王浆中喃唑酮代谢物3-氨基-2-嗯唑烷酮（3-Amino-oxazolidin-2-one，AOZ)、呋 喃它酮代谢物3-氨基-5-吗啉代甲基-2-嗯唑烷酮（3-Amino-5-morpholinomethyl-oxazolidin-2-one， AMOZ）、呋喃西林代谢物氨基脲（semicarbazideSEM)和呋喃妥因代谢物1-氨基乙内酰脲（1-aminohy dantoin，AHD)质谱/质谱测定方法。 本标准适用于蜂王浆中AOZ、AMOZ、SEM和AHD残留的定性确证和定量测定。 2方法提要 沉淀去除蛋白质，调pH值7.5后，清液过HLB小柱净化，分析物采用液相色谱-串联质谱测定，内标法 定量。 3试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为超纯水。 3.1甲醇：色谱纯。 3.2乙睛：色谱纯。 3.3乙酸乙酯：色谱纯。 3.4 邻硝基苯甲醛（2-NBA）。 3.5 二甲亚砜：色谱纯。 3. 6 乙酸铵：色谱纯。 3.7 5mmol/L乙酸铵水溶液称取0.19g乙酸铵溶于适量水中，再定容到500mL。 3.850%三氯乙酸：称50g三氯乙酸，加50g水溶解。 3.91mol/L氢氧化钠溶液：称取40g氢氧化钠，用水溶解定容至1000mL。 3.10 02-NBA衍生剂（50mmol/L）：称取0.0378g邻硝基苯甲醛到烧杯中，加入5mL二甲亚溶解， 该溶液的浓度为50mmol/L，现配。 3.110.1mol/L磷酸氢二钾：称取8.71g无水磷酸氢二钾.加人500mL水溶解。 3.120.2mol/L盐酸溶液：量取17mL浓盐酸用水定容至1000mL。 3.14标准溶液配制 3.14.1硝基呋喃类代谢物标准品：AOZ、SEM·HCI、AHD·HCI、AMOZ纯度均大于99%。 3.14.2硝基呋哺类代谢物同位素标准品：AOZ-D.纯度大于98%，SCA-15N-13C·HC1纯度大于 99%，AHD-13C纯度大于98%，AMOZ-Ds纯度大于98%。 3.14.3标准储备液：分别称取适量AOZ、AMOZ、SEM·HCI和AHD·HCI硝基呋喃代谢物标准， 用甲醇溶解并定容1.0mg/mL，0℃~4℃保存，有效期6个月。 3.14.4混合标准溶液：分别准确移取适量1.0mg/mLAOZ、SEM、AHD、AMOZ标准储备液（3.16）， 1 SN/T 2061—2008 用甲醇稀释定容至10ng/mL，0℃~4℃保存，有效期7d。 3.14.5同位素内标储备液：分别称取适量AOZ-D4、AHD-13C3、AMOZ-D和SCA-15N2-13C·HCI硝 基喃代谢物同位素标准品，用甲醇溶解并定容到25mL棕色容量瓶中，该溶液浓度为1.0mg/mL 0℃~4℃保存。 3.14.6混合同位素内标溶液：分别准确移取适量1mg/mLAOZ-D、SCA-15Nz-13C、AHD-13C3、 AMOZ-D，储备液（3.14.3），用甲醇稀释定容为10ng/mL，0℃～4℃保存。 3.14.7混合标准工作溶液：分别取混合标准溶液（3.14.4)0μl，60μL，100uL，200μL，400μL， 1000μL。加人混合同位素内标溶液（3.14.6)200μL，3mL0.2mol/L稀盐酸和100μL2-NBA衍生 剂，混勾后37℃放置过夜。用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH7.5士0.2,5mL乙酸乙酯液液萃取，将有 机相在40℃氮吹至干后，用1.0mL0.2%乙酸-乙睛（7+3，体积比）（3.13）溶解残渣，该混合标准工作 溶液相当于样品中含有0μg/kg.0.3μg/kg，0.5μg/kg，1.0ug/kg,2.0μg/kg，5.0μg/kg的硝基呋喃 代谢物残留。 3.15HLB小柱：OASISHLB小柱，60mg，3mL或相当者。使用前用5mL甲醇和5mL水预淋洗。 4仪器和设备 4.1液相色谱-质谱/质谱联用仪：配有电喷雾源（ESI）。 4.2 旋转浓缩器。 4.3混匀器。 4.4 真空固相萃取装置。 4.5 pH计：测量精度土0.02。 4.6 浓缩瓶：100mL。 4.7 具盖塑料离心管：50mL。 4.8 离心机：4000r/min。 4.9烘箱。 5试样制备与保存 取500g代表性蜂王浆样品，在室温下解冻，等样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分别装人 样品瓶中，密封，并标明标记。一份作为试验样，另一份在一18℃保存。 在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。 6测定步骤 6.1提取和净化 位素内标溶液（3.14.6），25mL.0.2mol/L盐酸溶液和100μl2-NBA衍生剂（3.10），混匀后放人 37℃土2℃烘箱内，避光放置过夜。加1.0mL50%三氯乙酸，轻轻混勾后，4000r/min离心5min，将 上清液过滤。滤液用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH7.5土0.2,过经预淋洗的HLB小柱（3.15），再加 10mL水清洗HLB小柱，用10mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液，40℃以下真空浓缩至干后，用1.0mL 6.2测定 6.2.1液相色谱串联质谱条件 a）色谱柱：Cg150mm×5mm，5μm或相当者； b) 流动相梯度洗脱条件见表1； c) 流速300μL/min； 2