SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1772—2006 进出口粮谷中玉米赤霉烯酮的测定 免疫亲和柱-液相色谱法 Determination of zearalenone in cereals for import and export-Immunoaffinity column and liquid chromatographicmethod 行业标准信息服务平台 2006-04-25发布 2006-11-15实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T1772—2006 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局负责起草。 本标准主要起草人：隋凯、李军、卫锋、宋文斌、林维宣、田苗。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 I SN/T1772—2006 进出口粮谷中玉米赤霉烯酮的测定 免疫亲和柱-液相色谱法 1范围 本标准规定了进出口粮谷中玉米赤霉烯酮检验的制样和免疫亲和柱-液相色谱测定方法。 本标准适用于进出口玉米、小麦中玉米赤霉烯酮的检验。 2制样 2.1试样制备 将样品按四分法缩分至1kg，全部磨碎并通过20目筛，混匀，均分成两份作为试样。分别装人洁净 的盛样容器内，密封，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生待测物含量 的变化。 2.2试样保存 将试样于一5℃以下避光保存。 3测定方法 3.1方法提要 试样中的玉米赤霉烯酮用乙腈-水提取后，提取液经免疫亲和柱净化。用配有荧光检测器的液相色 谱仪进行测定，外标法定量。 3.2试剂与材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相当的去离子水。 3.2.1甲醇：HPLC级。 3.2.2乙：HPLC级。 3.2.3乙腈+水（9+1)：取90mL乙腈加10mL水。 3.2.4氯化钠。 3.2.5玉米赤霉烯酮（zearalenone）标准品：纯度≥98%。 3.2.6玉米赤霉烯酮标准溶液：准确称取适量的玉米赤霉烯酮标准品，用乙睛配成浓度为0.1mg/mL 的标准储备液。根据需要用流动相稀释成适当浓度的标准工作液 准信息服务平台 3.3仪器与设备 3.3.1液相色谱仪配有荧光检测器。 3.3.2粉碎机。 3.3.3高速均质器。 3.3.4氮吹仪。 3.3.5空气压力泵。 3.3.6玻璃纤维滤纸。 3.3.7玻璃注射器：20mL。 3.3.8免疫亲和柱：玉米赤霉烯酮免疫亲和柱。 3.3.9微量注射器：100μL。 3.4测定步骤 3.4.1提取 称取试样约40g（精确到0.1g）于250mL具塞锥形瓶中，加入4g氯化钠及100mL乙睛十水 1 SN/T1772—2006 （9十1），以均质器高速搅拌提取2min。定量滤纸过滤，移取10.0mL滤液并加人40.0mL水稀释混 匀，以玻璃纤维滤纸过滤1次～2次，至滤液澄清，随即进行免疫亲和柱净化操作。 3.4.2净化 将免疫亲和柱连接于20mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL（相当于0.8g样品1)）上述提取滤 液注玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约每秒1滴～2滴流速缓慢 通过免疫亲和柱，直至2mL～3mL空气通过柱体。以5mL水淋洗柱子1次，弃去全部流出液，并使 2mL~3mL空气通过柱体。准确加人1.5mLHPLC级甲醇洗脱，流速为1mL/min~2mL/min，收 0.45um滤膜后供液相色谱测定。 3.4.3测定 3.4.3.1液相色谱条件 a） 色谱柱：Nova-PakCig柱（4μm），150mmX3.9mm（内径）或相当者； b) 流动相：乙腈十水+甲醇（46十46+8）； c) 流速：1.0mL/min; 检测波长：激发波长274nm；发射波长440nm； e） 进样量：50μL。 3. 4. 3.2 色谱测定 根据样液中玉米赤霉烯酮含量情况，选定浓度相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中玉米 赤霉烯酮响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样进行测定。在上 述色谱条件下，标准品色谱图参见附录A中图A.1。 3.4.4空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行。 3.4.5结果计算和表述 用色谱数据处理机或按式（1)计算试样中玉米赤霉烯酮的含量，计算结果需将空白值扣除。 .(1 AsXm 式中： X一试样中玉米赤霉烯酮的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； A一样液中玉米赤霉烯酮的峰面积； As一标准工作溶液中玉米赤霉烯酮的峰面积； 标准工作溶液中玉米赤霉烯酮的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V——样液最终定容体积，单位为毫升(mL)； m最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。 息服务平台 4测定低限、回收率 4.1测定低限 本方法的测定低限为0.005mg/kg。 4.2回收率 4.2.1玉米中玉米赤霉烯酮的添加浓度及回收率实验数据： 添加浓度在0.005mg/kg时，回收率为73.7%~89.4%； 1）对于玉米赤霉烯酮含量较高的样品，可将提取滤液进行适当稀释，以保证玉米赤霉烯酮的含量不超过免疫亲和 柱的吸附容量。 2