SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T1750—2006 动物源性食品中抗生素类药物残留 检测方法 微生物抑制法 Determination of antibiotics residues in animal derived foodMIA method 行业标准信息服务平台 2006-08-26实施 2006-01-26发布 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T1750—2006 前言 本标准参照了日本厚生省生活卫生局1996年版的《食品卫生检查指针》第6章“动物用医药品、饲 料添加物”。 本标准的附录A是规范性附录，附录B是资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 疫局。 本标准主要起草人：黄晓蓉、李寿崧、郑晶、杨方、陈彬、罗茂凰。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 I SN/T1750—2006 动物源性食品中抗生素类药物残留 检测方法微生物抑制法 1范围 本标准规定了动物源性食品中β内酰胺类、四环素类、大环内酯类和氨基糖苷类药物残留检测的试 样制备、保存和微生物抑制检测方法。 本标准适用于肉类、蛋、鱼和虾中的抗生素残留筛选检测，阳性结果须用其他方法进行确证。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3试样制备和保存 3.1试样制备 肉、鱼和虾：从原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放人高速组织捣碎机均质，充分混 ，用四分法缩分不少于500g试样。装人清洁容器内，并标明标记。 蛋：从原始样品中，随机分出一半（不少于500g），鲜蛋需去壳。将蛋黄和蛋白于混合器中充分混 匀，装人清洁容器内，作为试样，并标明标记。 制样操作过程中必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 3.2试样保存 肉、鱼、虾和蛋：试样于一18℃以下保存。 4测定方法 4.1方法提要 试样经缓冲液提取、温育和离心后，取上清液进行测定。利用抗生素对敏感菌的抑制作用来判别试 准信息服务平台 样中是否含有抗生素。 4.2设备和材料 4.2.1恒温箱：30℃士1℃，水平隔层。 4.2.2离心机。 4.2.3高速组织捣碎机。 4.2.4恒温水浴锅。 4.2.5涡旋振荡器。 4.2.6显微镜：10×100×。 4.2.7游标卡尺：测量范围0mm~200mm，精度0.02mm或抑制圈测量仪。 4.2.8灭菌平皿：直径90mm，底部平整的玻璃或一次性塑料灭菌平皿。 4.2.9圆形滤纸片：直径10mm，厚1.1mm。日本ToyoRoshiKaisha，Ltd.产品，或相当者。 4.2.10克氏瓶。 1 SN/T1750—2006 4.2.11可调移液器：10μL~100μL，100μ~1000μL。 4.3菌种和培养基 4.3.1菌种 4.3.1.1藤黄微球菌MicrococcusluteusATCC934l。 4.3.1.2枯草芽胞杆菌BacillussubtilisATCC6633。 4.3.1.3蜡样芽胞杆菌蕈状变种Bacilluscereusvar.mycoidesATCC11778。 4.3.2培养基 4.3.2.1保存及传代用细菌培养基：见第A.1章。 4.3.2.2增菌用液体培养基：见第A.2章。 4.3.2.3增菌用固体培养基：见第A.3章。 4.3.2.4检定用培养基：抗生素培养基5号（AM5）见第A.4章，抗生素培养基8号（AM8）见 第A.5章。 4.4试剂 本方法所用化学试剂为分析纯，试验用水为蒸馏水或去离子水，试验用水应符合GB/T6682的 规定。 4.4.1缓冲液 4.4.1.1柠檬酸-丙酮缓冲液 b）0.5mol/L氢氧化钾溶液：称取氢氧化钾（KOH)2.8g，用无菌蒸馏水溶解并定容至100mL。 c） 混合液：0.2mol/L柠檬酸溶液和0.5mol/L氢氧化钾溶液等量混合。 d) 柠檬酸-丙酮缓冲液：按混合液十丙酮十蒸馏水=35+35十30比例制备。 4.4.1.2pH4.5磷酸盐缓冲液：称取13.6g磷酸二氢钾（KH2PO4）用蒸留水溶解并定容至1000mL， 121℃高压灭菌15min。 4.4.1.3pH6.0磷酸盐缓冲液：称取8.0g磷酸二氢钾（KHzPO）及2.0g磷酸氢二钾（K,HPO），用 蒸馏水溶解并定容至1000mL，121℃高压灭菌15min。 4.4.1.4pH8.0磷酸盐缓冲液：称取0.523g磷酸二氢钾（KH2PO）及16.73g磷酸氢二钾 （K，HPO.），用蒸馏水溶解并定容至1000mL，121℃高压灭菌15min。 4.4.2抗生素标准溶液 4.4.2.1氨芊西林标准储备液：称取一定量的氨西林标准品，用灭菌去离子水溶解并定容至 1000μg/mL，置2℃～8℃冰箱保存，贮存期2d。 （4.4.1.3）稀释成0.025uμg/mL的标准工作液，须当日配制使用。 1000μg/mL，置2℃～8℃冰箱保存，贮存期1个月。 （4.4.1.4）稀释成0.5μg/mL的标准工作液，须当日配制使用。 4.4.2.5土霉素标准储备液：称取一定量的土霉素标准品，用0.1mol/L盐酸溶解并定容至 1000μg/mL，置2℃~8℃冰箱保存，贮存期7d。 4.4.2.6土霉素标准工作液：吸取一定量的土霉素标准储备液，用pH4.5磷酸盐缓冲液（4.4.1.2）稀 释成0.1ug/mL的标准工作液，须当日配制使用。 4.4.2.7红霉素标准储备液：称取一定量的红霉素标准品，用少量30%甲醇溶解，再用pH8.0 4.4.2.8红霉素标准工作液：吸取一定量的红霉素标准储备液，用pH8.0磷酸盐缓冲液（4.4.1.4）稀 2