SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1771—2006 进出口粮谷中T-2毒素的测定 免疫亲和柱-液相色谱法 Determination of T-2 toxin in cereals for import and export- Immunoaffinity column and liquid chromatography method 行业标准信息服务平台 2006-04-25发布 2006-11-15实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T1771—2006 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局负责 起草。 本标准主要起草人：卫锋、李军、隋凯、方晓明。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 I SN/T1771—2006 进出口粮谷中T-2毒素的测定 免疫亲和柱-液相色谱法 1范围 本标准规定了进出口粮谷中T-2毒素检验的制样和免疫亲和柱-液相色谱测定方法。 本标准适用于进出口玉米、小麦中T-2毒素的检验。 2制样 2.1试样制备 将样品按四分法缩分至1kg，全部磨碎并通过20目筛，混匀，均分成两份作为试样，分别装入洁净 的容器内，密封，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的 变化。 2.2试样保存 将试样于一5℃以下避光保存。 3测定方法 3.1方法提要 试样中的T-2毒素用甲醇-水提取后，提取液经免疫亲和柱净化，浓缩、衍生、定容后，用配有荧光检 测器的液相色谱仪进行测定，外标法定量。 3.2试剂与材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。 3.2.1甲醇。 3.2.2乙睛:HPLC级。 3.2.3甲苯：HPLC级。 3.2.4甲醇+水（8+2）.取80mL甲醇加20mL水。 3.2.50.325mg/mL4-二甲基氨基吡啶（DMAP）溶液：准确称取0.0325g于100mL容量瓶，甲苯稀 释至刻度。 3.2.60.3mg/mL1-氰酸葱（1-Anthroylnitrile1-AN)溶液：准确称取0.0300g于100mL容量瓶，甲 苯稀释至刻度。 3.2.7T-2毒素标准品：纯度≥98%。 3.3仪器与设备 3.3.1液相色谱仪配有荧光检测器。 3.3.2粉碎机。 3.3.3高速均质器。 3.3.4氮吹仪。 3.3.5空气压力泵。 3.3.6玻璃纤维滤纸。 1 SN/T1771—2006 3.3.7免疫亲和柱：T-2毒素免疫亲和柱。 3.3.8移液器。 3.4测定步骤 3.4.1提取 称取试样50g（精确到0.1g）于500mL玻璃混合杯中，加人100mL甲醇十水（8十2），均质器高速 稀释混匀，以玻璃纤维滤纸过滤，收集滤液。 3.4.2净化 将免疫亲和柱连接于10mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL（相当于1.0g样品）上述提取滤液 注人玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约1mL/min流速缓慢通过免 疫亲和柱，直至2mL～3mL空气通过柱体。以10mL水淋洗柱子1次，弃去全部流出液，并使2mL~ 3mL空气通过柱体。加入1.5mLHPLC级甲醇洗脱，流速为1mL/min，收集洗脱液于玻璃试管中，在 50℃以下氮气吹干，待衍生。 3.4.3衍生 于上述净化后的样品中，分别加人50uL浓度为0.325mg/mL4-二甲基氨基吡啶（DMAP)溶液和 50μL浓度为0.3mg/mL1-氰酸葱（1-AN），涡旋混合1min，于50℃土2℃恒温水浴中反应15min，在 冰水中冷却10min。在50℃以下氮气吹干。用1.0mL的流动相溶解，待测。 注：对于T-2毒素含量较高的样品，可将提取滤液进行适当稀释，以保证T-2毒素的含量不超过免疫亲和柱的吸附 容量。 3.4.4测定 3.4.4.1色谱条件 a) 色谱柱：ZORBAXEclipseXDB-Cis柱，4.6X150mm，5μm，或相当者； 流动相：乙腈+水（80+20）； ( 流速：1.0mL/min； (P 检测波长：激发波长381nm；发射波长470nm； e) 进样量：20μL。 3.4.4.2液相色谱测定 根据样液中T-2毒素衍生物含量情况，选定浓度相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中 T-2毒素衍生物响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样进行测 定。标准品色谱图参见附录A中图A.1。 3.4.5空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行。 3.4.6结果计算和表述 用色谱数据处理机或按式（1)计算试样中T2毒素的含量，计算结果需将空白值扣除。 服务平台 ...(1) AsXm 式中： X试样中T-2毒素的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 标准工作液中T-2毒素的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； A样品溶液中T-2毒素衍生物的峰面积； As标准工作溶液中T-2毒素衍生物的峰面积； V一一样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； 最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。 2