SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1626—2005 进出口肉及肉制品中甲硝唑、替硝唑、 奥硝唑、罗硝唑、二甲硝咪唑、塞克硝唑 残留量测定方法 天高效液相色谱法 Determination of metronidazole,tinidazole,ornidazole, ronidazole,dimetridazole and secnidazole residues in meat and meat products forimportand export-HPLC 行业标准信息服务平台 2006-02-01实施 2005-08-18发布 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T1626—2005 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国河北出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：王凤池、马振栋、郭春海、吕红英、艾连峰。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 I SN/T1626—2005 进出口肉及肉制品中甲硝唑、替硝唑、 奥硝唑、罗硝唑、二甲硝咪唑、塞克硝唑 残留量测定方法高效液相色谱法 1范围 本标准规定了肉及肉制品中罗硝唑、二甲硝咪唑及其共同的代谢物、替硝唑、奥硝唑、塞克硝唑、甲 硝唑7种硝基咪唑残留量的高效液相色谱测定方法。 唑残留量的测定。 2样品处理 将实验室样品用绞肉机全部绞碎。样品量太大时从每块样品上取代表性的部分，然后全部绞碎，混 合均匀后，分为两份，一份进行测定，另一份装人密闭容器内，一18℃冷冻避光保存。 3测定方法 3.1方法提要 试样中的硝基咪唑残留用乙酸乙酯提取，通过SCX柱净化后，用配有紫外检测器的高效液相色谱 仪测定，外标法定量。 3.2试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为HPLC级，水为高纯水。 3.2.1乙睛。 3.2.2甲醇。 3.2.3 、丙酮。 3.2.4 乙酸乙酯。 3.2.5 浓盐酸：优级纯。 3.2.6 冰乙酸：优级纯。 3.2.7 氨水：分析纯。 3.2.8 盐酸：0.1mol/L，吸取浓盐酸0.83mL，用水定容于100mL容量瓶中。 3.2.9 乙酸-乙酸乙酯（5+95）：5mL冰乙酸用乙酸乙酯定容至100mL。 3.2.10 氨水-乙腈（5十+95）：5mL氨水用乙腈定容至100mL。 3.2.11 0.45μm滤膜。 3.2.12 5-硝基咪唑（简写为DMZOH）。 3.2.13 标准储备液：分别称取每种硝基咪唑标准品各10mg（准确至0.1mg），用甲醇溶解，并分别定 容到10mL棕色容量瓶中，混匀，该溶液的浓度为1mg/mL。避光一18℃冷冻保存，保存期为1年。 3.2.14混合标准中间液I：取每种标准储备液各1mL，移入100mL棕色容量瓶中，用甲醇定容。该 溶液浓度为10μg/mL。避光一18℃冷冻保存，保存期为1年。 该溶液浓度为100ng/mL。置于冰箱中1℃～4℃下避光保存，保存期为3个月。 1 SN/T1626—2005 3.2. 16 标准工作液：根据需要，吸取一定量的混合标准中间液Ⅱ，用水稀释至所需浓度，现用现配。 3. 2. 17S SCX固相萃取柱：5mL乙酸-乙酸乙酯（5十95）预洗。空白实验有杂质干扰时，依次用10ml 整个过程应保持SCX柱湿润，最后柱上保留约1cm溶液，关闭活塞，柱上端连接储液器，贮液器底部塞 一小块脱脂棉，备用。 3.3仪器和设备 3.3.1高效液相色谱仪，配有紫外检测器。 3.3.2超声波清洗器。 3.3.3旋涡振荡器。 3.3.4旋转蒸发器。 3.3.5氮吹仪。 3.3.6均质器。 3.3.7离心机：最大转速5000r/min。 3.3.8固相萃取装置。 3.4测定步骤 3.4.1提取 称取5g（准确至0.01g）样品于50mL离心管中，加人20mL乙酸乙酯，均质1min后，超声提取 5min，再以3000r/min的速度离心10min，取上清液转移至鸡心瓶中。再用20mL乙酸乙酯重复提 取一次，合并上清液于同一鸡心瓶中。 3.4.2净化 将提取液于40℃下旋转蒸发至近干（不能全部蒸干），用5mL乙酸-乙酸乙酯（5十95）溶解，将溶液 转移到预洗过的SCX柱上的贮液器中，再用5mL乙酸-乙酸乙酯（5十95）洗鸡心瓶，洗液一并转移到 SCX柱上的贮液器中，打开活塞，以2mL/min流速滴下。依次用2.5mL丙酮，5mL甲醇，5mL乙腈 在2mL/min流速下淋洗柱子，用5mL氨水-乙睛（5十95）洗脱。弃去前2mL洗脱液，收集后面的洗脱 液于玻璃管中，在40℃水浴上用氮气小心吹干，用水定容至1mL，漩涡振荡或超声溶解，过0.45μm滤 液膜后，进行HPLC分析。 3.4.3测定 3.4.3.1 液相色谱参考条件 a） 色谱柱：Cis柱，250mm×4.6mm（内径），填料颗粒直径5μm或相当者。 b) 流动相：A：水，B：乙晴，C：甲醇。洗脱程序见表1。 表1方法的洗脱梯度程序 时间/min 0 5 12 20 23 28 A/(%) 77 77 12 71 LL 77 B/(%) 4 4 10 10 4 4 C/(%) 19 19 19 19 19 c） 动相流速：1.0mL/min。 d) 紫外检测器波长：320nm。 e） 色谱柱温度：35℃。 f）进样量：50μL。 3.4.3.2 2色谱测定 根据试样中被测物的含量情况，选取响应值相近的标准工作液一起进行色谱分析。标准工作液和 待测样液中被测物的响应值均应在仪器线性响应范围内。对标准工作液和样液等体积参插进样测定 2