SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1420—2004 香眩病诊断操作规程 Protocol of diagnosis for whirling disease 行业标准信息服务平台 2004-06-01发布 2004-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T1420—2004 前言 本标准的附录A、附录C、附录D均为规范性附录，附录B为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国珠海出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：吴小伦、薄清如、黄建珍、赖子平、兰乃洪。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 I SN/T1420—2004 昏眩病诊断操作规程 1范围 本标准规定了昏眩病的诊断操作规程。 本标准适用于进出口鲢鳟鱼的昏眩病检验检疫。 2材料 2.1仪器设备 普通天平，分析天平，普通离心机，微型振荡器，水浴锅，振荡水浴装置，普通显微镜，血球计，pH试 纸，研钵，解剖刀，镊子，烧杯，玻片，离心管，可调移液管等。 2.2试剂 漂白粉，10%福尔马林，1%孔雀绿，70%、80%、90%、95%、100%酒精，二甲苯，姬姆萨染色液（见附 血清蛋白，磷酸盐缓冲液（PBS）（见附录A），甲醇，丙酮。所有化学试剂均为分析纯。 3昏眩病诊断 3.1临床症状 病鱼作狂乱追尾运动，特别当喂食或被惊吓时症状加剧。在冷水条件下，旋转运动的临床表现通常 发生在感染后2个～3个月，并可持续长达一年。2月龄～8月龄的病鱼，驱干后部和尾部呈黑色。昏 眩病后期的病鱼鳃盖骨萎缩，鳃裸露在外，下颌骨畸形，脊椎弯曲，眼后头盖骨严重凹陷，这种鱼染病三 年后仍带有病原体。 3.2寄生虫检查 3.2.1病原体形态 该病病原体为脑粘体虫（MycosomacerebraLis）。脑粘体虫的孢子大小为（6.5μm～7μm）× 的明显可见的缝合线，无嗜碘泡（参见附录B）。 3.2.2菜样 3.2.2.1采样原则 选择有临床症状的鱼作寄生虫检查，若无症状，可根据鱼的数量随机抽样检查。 3.2.2.2采样数量 对有症状的鱼取5尾10尾作寄生虫检查，或对无症状鱼群则按表C.1进行抽查。 3.2.3涂片检查 3.2.3.1将头部纵切开，观察耳区软骨组织中有无胞囊（乳白色，直径为1mm~2mm）。 3.2.3.2若有胞囊，取一小块胞囊放在载玻片上，压碎，用450倍～600倍显微镜检查，观察是否有脑 粘体虫孢子。 检查。 3.2.3.4上述两项检查都未发现孢子，可按3.2.4检查。 3.2.4涂片染色检查 3.2.4.1将可疑鱼的头部割下并纵切开，45℃水中孵育1min3min，将松散的肉和脑移到一废物容 1 SN/T1420—2004 器（水和家用漂白剂比例为1：1）消毒，从脑壳、耳石、鳃拱处收集骨和软骨样。用等体积的10%福尔马 林于研钵磨碎样品。用水将所有磨碎样冲人小烧杯并使物质沉淀。 3.2.4.2涂5滴～10滴沉淀物到一干净的显微镜玻片上，空气干燥。 3.2.4.31%孔雀绿染色5min，流水冲洗，并将玻片依次放置于70%、90%100%酒精中各30s，脱水 脱色。 3.2.4.4200×镜检。观察是否存在具有深绿色极囊的绿色卵形虫体。 3.2.5切片检查 3.2.5.1将头保存在10%的中性缓冲福尔马林液中约3d。 3.2.5.2除去石灰质后，流水冲洗4h~5h。 3.2.5.3用70%、80%、95%、100%酒精脱水，其中95%、100%酒精重复两次。各级酒精脱水的时间 约45min~60min，然后用二分之一100%酒精加二分之一二甲苯脱水30min~45min，再后人二甲苯 直到组织透明为止约15min~30min。 3.2.5.4用石蜡包理。 3.2.5.5切成5μm~7μm的切片。姬姆萨染色（见附录D)。 3.2.5.6200×镜检观察孢子和营养体。 3.3综合判定 3.3.1出现上述临床症状，又检查到脑粘体虫的孢子或营养体，则判定为昏眩病。 3.3.2未出现上述临床症状，但检查到脑粘体虫的孢子或营养体，也判定为昏眩病。 行业标准信息服务平台 2