SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1488—2004 免病毒性出血症血凝抑制试验操作规程 Protocol of haemagglutination-inhibition test for viral haemorrhagicdisease of rabbit 行业标准信息服务平台 2004-11-17发布 2005-04-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T1488—2004 前言 本标准的附录A为规范性附录。 本标准由中华人民共和国认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：王水明、彭钰欣、朱雪良、刘学辉。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 I SN/T1488—2004 兔病毒性出血症血凝抑制试验操作规程 1范围 本标准规定了免病毒性出血症血凝抑制试验操作规程。 本标准适用于检测免体中免病毒性出血症病毒和血清中的免病毒性出血症抗体。 2原理 免病毒性出血症病毒能使人的O型红细胞发生凝集，而对其他动物的红细胞不发生凝集或凝集不 明显；兔病毒性出血症病毒感染免后，免体会产生特异性抗体。这种抗体和免病毒性出血症病毒反应 后，能够抑制病毒对人的O型红细胞的凝集。 3材料和试剂 3.1仪器 普通天平、分析天平、普通离心机、96孔V型血凝板、25μuL可调移液器、恒温箱、微型振荡器等。 3.2可疑兔及正常兔肝悬液的制备 分别将肝脏剪碎，按1：10加入生理盐水后匀浆，再以4000r/min离心30min，取上清液做血凝 试验。 3.3生理盐水 配制0.85%浓度的生理盐水。 3.4阿氏液（Alsever's） 配制见附录A。 3.51%人0”型红细胞悬液的制备 取新鲜的人“O”型红细胞于阿氏液中（置4℃可保存一周）。用时取人“O”型红细胞以20倍量生理 盐水混勾洗涤红细胞，2000r/min离心15min，弃上清，重复洗涤四次，洗涤后的红细胞用生理盐水配 成1%红细胞悬液置4℃备用，在72h内用完。 3.6抗原、阳性血清 由指定单位供应，按说明书使用。 3.7被检血清的处理 按常规无菌采取血样，分离血清，并对血清做56℃、30min灭活处理。 4操作方法 4.1α-微量血凝抑制试验 4.1.1实验步骤 4.1.1.1每个样品作相同的2排，从第1孔开始到第11孔每孔加生理盐水25L 4.1.1.2第1、2孔加可疑兔肝组织悬液25uL。 4.1.1.3从第2孔开始，用25μL移液管作等量倍比稀释至第10孔，最后1孔弃去25μL（其病毒稀释 度则为10、20、40、80……等）。 4.1.1.4第12孔为正常免肝悬液对照。 4.1.1.6每孔加入1%人“O"型红细胞25μL，立即在微型振荡器上摇匀，置4℃冰箱作用45min，待对 1 SN/T1488—2004 照孔红细胞完全沉积后观察结果。 4.1.2红细胞凝集效价表示方法和结果判定 4.1.2.1红细胞凝集效价表示方法： +十+十为100%凝集，无红细胞沉积； 十十十为75%以上凝集，有少于25%的红细胞沉积； ++为50%～75%凝集，有少于50%的红细胞沉积； +为少于50%凝集，有多于50%的红细胞沉积； （一）为100%的红细胞沉积。 4.1.2.2结果判定 检查各种对照。正常免肝悬液（阴性对照）应该出现红细胞完全沉积，而生理盐水对照红细胞也应 完全沉积。第1排微量血凝试验和第2排微量血凝抑制试验两排孔的血凝效价相差2个滴度以上（含 2个滴度)为阳性。 4.2β-微量血凝抑制试验 4.2.1实验步骤 4.2.1.1在96孔V型微量滴定板上的第2~11孔加人生理盐水25μL，然后在第1、2、12孔加人1：5 稀释的待检血清25uL，从第2孔开始，用移液器作倍比稀释至第9孔，最后1滴稀释液弃去。 37℃温箱作用10min，第10孔是4个血凝单位对照，第11孔是生理盐水对照，第12孔为血清对照。 4.2.1.3每孔加入1%人“O”型细胞25μL，立即在微型混合器上摇匀，置37℃温箱45min，待对照孔 的细胞沉降后观察结果。 4.2.2结果判定 结果观察和记录同血凝试验，以出现完全抑制红细胞凝集的血清最高稀释度为该被检血清的血凝 抑制价。 行业标准信息服务平台 2