SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1310—2011 代替SN/T1310—2003 动物结核病检疫技术规范 Quarantine protocol for animal tuberculosis 行业标准信息服务平台 2011-05-31发布 2011-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1310—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替SN/T1310—2003《猴结核皮内变态反应操作规程》。 本标准与SN/T1310—2003相比，主要技术变化如下： 修改了标准的名称； 增加了细菌学检查方法； -增加了实时荧光PCR方法； 一增加了常规PCR检测方法； 增加了其他动物结核皮内变态反应试验方法。 本标准参考了世界动物卫生组织（OIE)发布的《陆生动物诊断试验和疫苗手册》（2009版）中2.4.7 章"Bovine tuberculosis"和 2.3.6章"Avian tuberculosis"。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人：陈茹、许如苏、田纯见、史夏玲、吴晓薇、曾碧健、苏世敏、罗长保、周科、鱼海琼、 洪琼华、孙岩松。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： SN/T1310—2003。 行业标准信息服务平台 1 SN/T 1310—2011 动物结核病检疫技术规范 1范围 本标准规定了动物结核病的结核菌素皮内变态反应试验、细菌学检查、实时荧光聚合酶链式反应 (PCR）和常规PCR检测方法的技术要求 本标准适用于进出境牛、猪、猴、禽等动物结核病的检疫和诊断。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 3 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 PPD(purifiedproteinderivative）：提纯蛋白衍生物，提纯结核菌素 IU(internationalunits）：国际单位 PCR（polymerasechainreaction）：聚合酶链式反应 EDTA（ethylenediaminetetraaceticacid)：乙二胺四乙酸 PBS(phosphatebuffersolution）：磷酸盐缓冲液 dNTP(deoxyribonucleosidetriphosphate）：脱氧核苷酸三磷酸 Taq酶：TaqDNA聚合酶 UDG(uracilDNAglycosylase)：尿嘧啶DNA糖基化酶 DMSO(dimethyl sulfoxide):二甲基亚砜 标准信息 bp(basepair)：碱基对 4 生物安全要求 服务平台 样品采集、样品处理及检测过程所涉及的实验操作，应遵守GB19489的有关规定。 5结核菌素皮内变态反应试验 5.1器材 5.1.1弯剪。 5.1.2卡尺。 5.1.3注射器：可采用医用玻璃卡介苗注射器、皮试专用连续注射器或1mL一次性无菌注射器，针头 规格为0.5mm×10mm。 5.1.4脱脂棉。 1 SN/T 1310—2011 5.2试剂 5.2.1灭菌生理盐水。 5.2.2牛型PPD：根据使用说明将原液用灭菌生理盐水或稀释用水稀释为使用浓度。PPD冻干粉稀 释：在无菌状态下吸取一定量的灭菌生理盐水或稀释用水，注人冻干粉玻璃瓶中，充分摇匀后使用，应现 配现用。 5.2.3禽型PPD：配制方法同5.2.2。 5.2.4人型PPD：配制方法同5.2.2。 5.2.575%酒精。 5.3牛结核皮内变态反应试验 5.3.1操作方法与结果判定 可单独采用牛型PPD，也可同时采用牛型PPD和禽型PPD进行试验。 注射部位在颈侧中部上三分之一处或尾根部。3个月以内的特牛也可在肩脚部进行。应确认注人 皮内。 颈部术部剪毛，直径约10cm，用卡尺测量术部中央皮皱厚度，作好记录，术部应无病变。牛型和禽 型PPD的注射部位应间隔开，在颈部同侧应间隔约12cm15cm，或在不同侧进行。用75%酒精消毒 注射部位，在皮内注人牛型PPD或禽型PPD,剂量为牛型PPD每头0.1mL、不低于2000IU,或按试剂 说明书配制的剂量；禽型PPD每头0.1mL、不低于2000IU,或按试剂说明书配制的剂量。 注射后72h观察判定结果。仔细观察局部有无发热、肿胀等炎性反应，用卡尺测量皮皱厚度，注射 前后同一部位的卡尺测量方向应保持一致。在记录表上作好详细记录。 5.3.2单独采用牛型PPD 颈部注射。术部注射前后皮厚差大于或等于4mm，或出现典型炎性反应，判为阳性；皮厚差大于 2mm并小于4mm，且无典型炎性反应判为可疑；皮厚差小于或等于2mm，无典型炎性反应，判为阴 性。对于已确认感染的牛群，皮试出现任何可触摸或可见的肿胀反应均判为阳性。 尾根部注射。出现反应判为阳性，未出现可触摸或可见的炎性反应判为阴性。 5.3.3同时采用牛型PPD和禽型PPD 注射牛型PPD部位的皮厚差大于注射禽型PPD部位的皮厚差4mm以上，或对牛型PPD反应为 阳性（判定见5.3.2）、并且对牛型PPD的反应大于对禽型PPD的反应、两者皮厚差在2mm以上，判为 牛型PPD皮内变态反应试验阳性；其他情况下，注射牛型PPD部位的皮厚差天于注射禽型PPD部位 为牛型PPD皮内变态反应试验阴性；对禽型PPD的反应大于对牛型PPD的反应，二者皮厚差在2mm 以上，判为禽型PPD皮内变态反应试验阳性。 5.3.4复检 判为可疑反应的，于42d后进行复检。结果仍为可疑或阳性的，判为阳性。 5.4猴结核皮内变态反应试验 5.4.1操作方法 由助手对猴进行保定，使其两前肢向背后，用左手抓住猴头部后侧的皮毛，使之不得任意转动。注 2