SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1171—2011 代替SN/T1171.1—2003,SN/T1171.2—2003,SN/T1676—2005 山羊关节炎-脑炎和绵羊梅迪-维斯纳病 检疫技术规范 Quarantine protocol for caprine arthritis-encephalitis and Maedi-visna of sheep 行业标准信息服务平台 2011-02-25发布 2011-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1171—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 免疫吸附试验》、SN/T1171.2一2003《山羊关节炎-脑炎抗体检测方法——琼脂免疫扩散试验》与 SN/T1676一2005《山羊关节炎-脑炎病毒分离操作规程》。 本标准参考世界动物卫生组织（OIE）《陆生动物诊断试验和疫苗使用手册》（2008年）的有关内容 编制而成，其技术内容与OIE推荐的标准方法一致。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准的起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人：陈书、秦智锋、花群义、詹爱军、朱中武、卢体康、朱玉兰、孙洁、曹琛福、 曾少灵、陈泽华、张彩虹。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： SN/T 1171.1—2003; —SN/T1171.2—2003; SN/T1676—2005。 行业标准信息服务平台 I SN/T1171—2011 山羊关节炎-脑炎和绵羊梅迪-维斯纳病 检疫技术规范 1范围 本标准规定了山羊关节炎-脑炎和绵羊梅迪-维斯纳病临床诊断和病毒分离与鉴定、PCR检测、琼脂 凝胶免疫扩散试验和酶联免疫吸附试验诊断技术。 本标适用于山羊关节炎-脑炎和绵羊梅迪-维斯纳病的疫情监测、诊断与检疫。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 CAE（caprinearthritis-encephalitis）：山羊关节炎-脑炎 CAEV（caprinearthritis-encephalitisvirus）：山羊关节炎-脑炎病毒 GSM(goat synovial membrane)：山羊滑液囊膜 HBSS(Hanks'balanced salt solution)：汉克氏平衡盐溶液 MV(Maedi-visna）：梅迪-维斯纳病 准信息服务 MVV(Maedi-visnavirus）：梅迪-维斯纳病毒 SCP（sheepchoroidplexus）：绵羊脉络丛 SRLV（smallruminantlentiviruses）：小反台兽慢病毒 4临床诊断 小反台兽慢病毒（SRLV）包括山羊关节炎-脑炎病毒（CAEV）和梅迪-维斯纳病毒（MVV），通过核 苷酸序列比较研究，发现其系统发育存在密切的相关性。SRLV引起山羊和绵羊的脑、肺、关节和乳腺 组织发生炎性病变。除了小山羊在感染的数月内可出现脑炎症状外，其余的在2岁前几乎见不到任何 临床症状。尽管天于2岁的感染动物也只有一少部分表现出临床症状，但是在临床上还是可以对 SRLV感染作出诊断。CAE的临床症状主要有5种表现形式：关节炎型（跛行、不愿站立与行走、关节 僵硬、肿胀、跪膝行走）、脑炎型（运动失调、肢体姿态异常、进行性麻痹与瘫、精神抑郁、失明、头歪斜 等）、肺炎型（长期性咳嗽、呼吸困难、消瘦）、乳房炎则（乳房肿胀、变硬、产奶量下降）与慢性消瘦型（食欲 不受影响而出现进行性消瘦）。成年山羊以关节炎型最常见，而脑炎型则常见于2月～4月龄的小山 羊；慢性消瘦型可以单独出现，也可以与其他任一临床型同时出现。MV则以慢性进行性肺炎为主，所 以它又被称之为绵羊进行性肺炎（ovineprogressivepneumonia，OPP）。其他资料参见附录A。 1 SN/T 1171—2011 5病毒分离与鉴定 5.1概述 将原代或传代山羊胎儿关节滑液囊膜（GSM）细胞（分离CAEV的指示细胞）或者绵羊脉络丛 者外周血液中的白细胞共同培养。动物死亡后，最容易的病毒分离方法是把感染组织（如：肺、滑液囊 膜、脉络丛或者乳腺组织）进行移植培养。也可以从宰后的肺脏中收集巨噬细胞与指示细胞共同培养。 其特征性的细胞病变（CPE）是：出现树枝状、能折光的星状细胞或者合胞体。CAEV或者MVV的存在 与否，可以用免疫标记方法或电镜镜检法来进行鉴定。 5.2仪器与材料 5.2.1二氧化碳培养箱。 5.2.2灭菌手术剪、刀与镊子。 5.2.3无菌培养皿。 5.2.425cm²细胞培养瓶。 5.2.5聚四氟乙烯袋。 5.2.6灭菌吸管（5mL、10mL）与巴氏吸管。 5.2.7培养基过滤除菌系统。 5.2.8倒置显微镜。 5.3标准毒株与试剂 本标准所用化学试剂除另有特殊规定外，均为分析纯级。实验用水符合GB/T6682规定。 5.3.1CAEV标准毒株、MVV标准毒株 业标准信息服 5.3.2抗菌素贮存液：配制见B1。 5.3.3细胞生长液：配制见B.2。 5.3.4细胞维持液：配制见B.3。 5.3.5胰酶消化液：配制见B.4。 5.3.6Hanks平衡盐溶液(HBSS)：配制见B.5。 5.3.7Ficoll-PaquePREMIUM:聚蔗糖密度梯度离心介质 5.4指示细胞 示细胞可自行制备，或者由权威机构提供。GSM细胞或者SCP细胞可以从胎羊或新出生而未感染本 病的羊制备，繁殖4代或5代后贮存于液氮中。复苏的细胞在传代10代～15代之前均可用于共同 培养。 GSM原代细胞的制备和继代细胞培养：见附录C。 5.5病料的采集 5.5.1活动物病料的采集：对于疑似CAEV感染的活山羊，无菌条件下采集外周血液、泌乳期的乳汁、 或者关节囊液，从中制备白细胞。 5.5.2动物户体病料的采集：无菌操作收集尽可能新鲜的可疑组织样品，如肺、滑液囊膜、乳腺组织等， 放入灭菌的HBSS或细胞生长液中。从肺泡冲洗物（死后气管-肺泡冲洗物）中较易制备肺泡巨噬细胞， 2