SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1272—2003 榆枯萎病菌检疫鉴定方法 Inspection and identification of Ophiostoma novo-ulmiBrasier and Ophiostoma ulmi (Buism.) Nannf. 行业标准信息服务平台 2003-05-28发布 2003-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T1272—2003 前言 本标准的附录C为规范性附录，附录A和附录B为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：国家质量监督检验检疫总局动植物检疫实验所。 本标准主要起草人：吴品珊、严进。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准 行业标准信息服务平台 I SN/T 1272—2003 榆枯萎病菌检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了进境植物检疫中榆枯萎病菌的检疫鉴定方法。 本标准适用于来自榆枯萎病菌有发生国家和地区（参见附录A）的榆属（UlmusL.）苗木、原木和木 制品中榆枯萎病菌的入境检疫。 2术语和定义 本标准采用下列术语和定义。 2. 1 异宗配合heterothallism 菌体在性的配合上有雌雄和（或）亲和力的分化，只有一定的异宗菌体（一般以十和一或A1和A2 加以区别)才能配合。 2.2 传病介体 vector 对侵染性病害的病原体起转移作用并创造侵人条件的生物，如昆虫、线虫等。 3原理 3.1榆枯萎病菌的分类地位 英文名：pathogens of Dutch elm disease,pathogens of elmwilt disease 学名：Ophiostomanovo-ulmiBrasier Ophiostoma ulmi (Buism.)Nannf. 主要异名：Ceratocystisulmi（Buism，）Moreau 榆枯萎病菌属真菌界（Fungi）子囊菌门（Ascomycota），核菌纲（Pyrenomycetes），球壳目（Sphaeria les），长喙壳科（Ophiostomataceae），长喙壳属（OphiostomaSydow&Sydow）。此病菌是榆属树上的有 害寄生真菌，可侵染各龄榆树，引致榆树于枯、死亡，称为榆枯萎病或荷兰榆病。 榆枯萎病菌由Ceratocystis属重新归人Obhiostoma。英国的Brasier在1991年将病菌致病力强的 侵袭性亚群（aggressive subgroup），提升为新种Ophiostoma novo-ulmiBrasier；Ophiostomaulmi （Buism.）Nannf.则是原来的另一个亚群一一致病力弱的非侵袭性亚群（non-aggressivesubgroup）。 榆枯萎病菌的这两个种在菌落培养性状、生长的适宜温度、子囊壳的形态、致病性、毒素的生成和分 子生物学等许多方面存在较大差异。 致病力强的Ophiostomanovo-ulmi种内又分为两个小种，欧亚小种EAN（Eurasianrace）和北美小 种 NAN(North American race)。 3.2寄主 榆枯萎病菌主要为害榆属（UlmusL.）树木。以美洲榆（U.americana），荷兰榆（（U.hollandica）， 山榆（U.glabra），英国榆（U.procera）等较为感病，人工接种可为害榉属（ZelkouaS.）。 3.3传播途径 榆枯萎病菌的主要自然传播方式是随传病介体一一昆虫传播，也可通过根部接触传播。介体昆虫 在濒于死亡的病树树皮内产卵，次年羽化出的成虫。这些成虫的体表和体内带有大量的病菌，取食健康 的树木，使病菌传播扩散。已肯定的昆虫介体有18种，其中最主要的是欧洲榆小鑫（Scolytusmultist- 1 SN/T 1272—2003 riantus）、欧洲大榆小（Scolytusscolytus），短体边材小（Scolytuspygmaeus）和美洲榆小（Hy lurgopinusrufipes)。 3.4鉴定原理 榆枯萎病菌的两个种（Ophiostomanovo-ulmi和Ophiostomaulmi）均产生异宗配合的有性子囊孢 子和三种类型的无性孢子。无性孢子第一类是发簇孢属（Sporothria）的分生孢子；第二类是长在孢梗 束上的束丝无性孢子，称粘束孢属（Pesotum）；第三类是酵母状分生孢子（Blastomycessp.）。 榆枯萎病菌的形态特征，以及生物学特性和对寄主造成的症状特征是鉴定榆枯萎病菌的依据（参见 附录B)。 4仪器设备和试验用具 4.1仪器设备 （500mL），试管（直径12mm），培养皿（直径9cm），载玻片（长×宽为76.2mmX25.4mm，厚 0.8mm)，盖玻片(18mmX18mm)，酒精灯。 4.2试验用具 斧头，锯子，测量用尺子，医用手术刀、手术剪和镊子。 5试剂、培养基和标准菌株 5.1试剂 琼脂粉、麦芽提取物、蒸馏水、乙醇、永久封片剂。 5.2培养基 5.2.1基础培养基 采用Oxoid麦芽汁培养基（MEA），具体配制方法：33gOxoid麦芽提取物加10gOxoid纯净琼脂， 溶于1L水中，15磅15min高压灭菌。 Oxoid麦芽汁培养基是鉴定病菌种和小种的重要培养基，主要用于病菌培养性状的观察测定以及 菌种的保存。 5.2.2选择性培养基 选择性培养基主要用于从病木上分离榆枯萎病菌。配制方法为：0.2g放线菌酮溶于100mL水， 取50mL加于1LOxoid麦芽汁培养基内，15磅15min高压灭菌后，冷至45℃时加入10mL1%链霉 素和青霉素混合液。制成后5℃暗处储藏，放线菌酮为剧毒品。 5.2.3获得不同类型孢子的培养基 发簇孢属（Sporothria）的孢子可在室温下大多数培养基上形成； 粘束梗霉属（Pesotum）的孢子最适于在ESA培养基上形成。ESA的配制方法为：将健康的榆树去 掉树皮和枝条，切成直径0.5cm的小块，取50g加人15g琼脂和500mL的水中，15磅15min高压 灭菌。 酵母状分生孢子宜采用Tchernoff的改良培养液获得。配制方法为：20g葡萄糖、2g天门冬酰胺、 1.5g磷酸二氢钾、1g硫酸镁、20mg硫酸锌、10mg三氯化铁、1mg维生素B和1mg维生素B，加人 1L蒸馏水中混合，15磅15min高压灭菌。 子囊孢子在ESA培养基上较易形成。但需要A型和B型2种不同交配型的孢子进行异宗配合才 能形成子囊壳。 5.3标准菌株 Ophiostoma novo-ulmiBrasier欧亚小种（EAN)A交配型（Amatingtype)，雌性;B交配型（Bmat- 2