出口蜂蜜中氟胺氰菊酯残留量检验方法液相色谱法 Determination of fluvalinate residues in honey for exportLiquid chromatographic method SN/T0213.5—2002 前言 本标准是按照GB/T1.1一1993《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分： 标准编写的基本规定》及SN/T0001一1995《出口商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法 标准编写的基本规定》的要求进行编写的。其中测定方法是参考国内外有关文献，经研究、改进 和验证后制定的。本标准同时制定了抽样和制样方法。 测定低限是根据国际上对蜂蜜中氟胺氰菊酯残留量的最高限量和测定方法的灵敏度而制定 的。 本标准附录A为提示的附录。 本标准由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国湖北出入境检验检疫局和湖南出入境检验检疫局共同起草。 本标准主要起草人：曾静、戴华、林雁飞、胡小钟、倪澜荪、余建新、吴涛。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 1 范围 本标准规定了出口蜂蜜中氟胺氰菊酯残留量检验的抽样、制样和液相色谱测定方法。 本标准适用于出口蜂蜜中氟胺氰菊酯残留量的检验。 2抽样和制样 2.1检验批 同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。 2.2抽样数量 批量，件 1~10 1 11～~50 5 51～100 10 101～500 每增加100，增取5 501以上 每增加100，增取2 2.3抽样工具 2.3.1取样管：不锈钢管，长约115cm，内径约2.5cm。 2.3.2混样器：糖瓷桶（或杯）。 2.3.3样品瓶：500mL具塞广口玻璃瓶。 2.4抽样方法 按2.2规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。将玻璃管缓缓从开口处放入直至桶底，吸取样 品。如遇蜂蜜结晶时，用不锈钢管缓缓插入，直至桶底，抽取样品。每件抽取样品不少于100g 作为原始样品。将所取样品倾入混样器内，混和均匀，分出约1kg，装入清洁干燥的样品瓶内， 加封后，标明标记，及时送交实验室。 如属瓶装蜂蜜，按应开件数，从每件中随机取一瓶，标明标记，及时送交实验室。 2.5试样制备 将取回样品充分搅匀，均分成两份，装入试样瓶中作为试样。密封，标明标记。 如取回样品中有结晶析出，则将样品瓶加盖后，置于不超过40℃的水浴中温热。待结晶全部 融化后，启盖，充分搅匀，均分成两份，密封，并标明标记。 如属瓶装蜂蜜，将取回的全部蜂蜜，倒在一起，充分搅匀，分取出约1kg代表性样品。再将 1kg代表性样品经搅匀后，均分成两份，装入试样瓶中作为试样。密封，标明标记。 2.6试样保存 将试样于室温下保存。 注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 3测定方法 3.1方法提要 试样碱化后用正已烷-丙酮混合溶液提取，提取液经蒸干后用乙和正已烷进行液液分配净 化，使被测物进入乙睛层。乙睛提取液再经蒸干，用乙定量溶解残渣，溶液供液相色谱测定， 信息服务平台 外标法定量。 3.2试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为蒸馏水。 3.2.1乙睛：液相色谱纯。 3.2.2氢氧化钠溶液：0.5g/L水溶液。 3.2.3乙酸溶液：体积分数0.2%水溶液。 3.2.4正已烷：用乙饱和。 3.2.5乙睛：用正已烷饱和。 3.2.6丙酮：重蒸馏。 3.2.7正已烷：重蒸馏。 3.2.8氟胺氰菊酯标准品：纯度≥97%。 3.2.9氟胺氰菊酯标准溶液：准确称取适量的氟胺氰菊酯标准品，用乙腈配成浓度为1mg/mL的 标准储备液，根据需要再用乙睛稀释储备液，配成适当浓度的标准工作液。 3.3仪器和设备 3.3.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器。 3.3.2旋转蒸发器。 3.3.3旋涡混匀器。 3.3.4离心机：2000r/min。 3.3.5离心管：100mL，具塞。 3.3.6浓缩瓶：100mL，50mL。 3.4测定步骤 3.4.1提取 称取试样约25g（精确至0.01g）于100mL离心管中，加15mL氢氧化钠溶液（3.2.2)，在旋涡 混匀器上混匀1min，使试样溶解。加入20mL正已烷和10mL丙酮，在旋涡混匀器上提取3min， 于2000r/min离心3min，将正已烷层转移到100mL浓缩瓶中。于残液中再加入20mL正已烷和 10mL丙酮，重复上述操作两次，合并正已烷层于同一浓缩瓶中，于40℃旋转蒸发至近干。 3.4.2净化 用10mL正已烷饱和的乙睛溶解残渣，转入另一100mL离心管中。加入乙睛饱和的正已烷10 mL，在旋涡混匀器上混匀2min，于2000r/min离心5min后，将上层正已烷相弃去。于残液中 再加入乙睛饱和的正已烷10mL，重复上述操作两次，将乙睛相转入50mL浓缩瓶中。乙睛相于 40℃旋转蒸发至近干，残渣定量加入2.00mL乙睛溶解，过0.45um微孔滤膜，滤液供液相色谱 测定。 3.4.3测定 3.4.3.1液相色谱条件 a）色谱柱：C18柱，250mmX4.6mm（内径)，粒径5μm，或相当者； b）流动相：乙睛-0.2%乙酸水溶液（80+20)： c）流速：0.5mL/min; d）柱温：室温； e）检测波长：257nm； f）进样量：20μL。 3.4.3.2色谱测定 根据样液中被测氟胺氰菊酯含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液 中氟胺氰菊酯响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。 在上述色谱条件下，氟胺氰菊酯保留时间约为26min，标准品色谱图见附录A（提示的附录）中图 Al。 3.4.4空白试验 除不加试样外，均按上述测定步骤进行。 3.4.5结果计算和表述 用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中氟胺氰菊酯残留含量： h, Xm 式中：X一一试样中氟胺氰菊酯残留含量，mg/kg; h一一样液中氟胺氰菊酯的峰高，mm; hs—一标准工作溶液中氟胺氰菊酯的峰高，mm; c一一标准工作溶液中氟胺氰菊酯的浓度，μg/mL； V一一样液最终定容体积，mL； m一一最终样液所代表的试样量，g。 标准信息服务平台 注：计算结果需扣除空白值。 4测定低限、回收率 4.1测定低限 本方法的测定低限为0.01mg/kg。 4.2回收率 蜂密中氟胺氰菊酯的添加浓度及其回收率的实验数据： 在0.01mg/kg时，回收率为87.0%； 在0.05mg/kg时，回收率为90.0%； 在0.10mg/kg时，回收率为90.5%。