ICS 67.140.20 B35 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3514—2019 咖啡中绿原酸类化合物的测定 高效液相色谱法 Determination of chlorogenic acids in coffee- High performance liquid chromatography 行业标准信息服务平台 2019-12-27发布 2020-04-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3514—2019 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业农村部捷出。让服务 本标准由农业农村部热带作物及制品标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所、农业农村部农产品质量监督检验测 试中心（昆明）、农业农村部农产品质量安全风险评估实验室（昆明）。 本标准主要起草人：邵金良、黎其万、刘兴勇、林涛、王丽、刘宏程、汪禄祥、陈兴连、樊建麟。 行业标准信息服务平台 NY/T3514—2019 咖啡中绿原酸类化合物的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了咖啡中6种绿原酸类化合物的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于咖啡中5-咖啡酰奎宁酸、绿原酸、4-咖啡酰奎宁酸、3，4-二咖啡酰奎宁酸、4，5-二咖啡酰 奎宁酸和3，5-二咖啡酰奎宁酸等单个或多 个组分含量的测 2规范性引用文件 下列文件对于本文件 的应用 凡是不注日期的引用文 GB/T6682 分析实 NY/T 1518 袋装 RES 3原理 咖啡中的 种 效液相 保留时间定性、 RAL 外标法定量。 4试剂和材 除另有说明 外水为 4.1试剂 4.1.1甲醇 OH.CAS 4.1.2磷酸（） 4.1.3磷酸溶 反磷酸（4） 4.1.4磷酸-甲醇 D20mL，混匀。 ER 4.2标准品 4.2.15-咖啡酰奎宁 906-3 4. 2. 2 绿原酸（C16H180 CAS号！3 %66 4.2.3 4-咖啡酰奎宁酸（C Og,CAS 4.2. 4 3,4-二咖啡奎宁酸（C 012CAS号：14534-61-3)：纯 4. 2. 5 54,5-二咖啡酰奎宁酸（C25H24O1 4. 2. 6 3,5-二咖啡酰奎宁酸（C25H2.O12，CAS号：2450-53-5）：纯度≥99%。 4.3标准溶液 4.3.1单一绿原酸类化合物标准储备溶液：分别准确称取5-咖啡酰奎宁酸20mg、绿原酸80mg、4-咖啡 酰奎宁酸20mg、3,4-二咖啡酰奎宁酸5mg、4,5-二咖啡酰奎宁酸5mg和3,5-二咖啡酰奎宁酸5mg（精 确至0.0001g)于10mL棕色容量瓶中，用磷酸-甲醇溶液（4.1.4)溶解并稀释至刻度，配制成浓度分别为 2000mg/L、8000mg/L、2000mg/L、500mg/L、500mg/L和500mg/L的单一绿原酸类化合物标准储 备溶液，一18℃以下避光储存，有效期一个月。 4.3.2绿原酸类化合物混合标准中间溶液：分别准确吸取1.0mL单一绿原酸类化合物标准储备溶液 （4.3.1)于10mL棕色容量瓶中，用磷酸-甲醇溶液（4.1.4)稀释至刻度，配制成绿原酸类化合物混合标准 中间溶液。一18℃以下避光储存，有效期一周。 I NY/T 3514—2019 4.3.3绿原酸类化合物系列混合标准工作溶液：分别吸取绿原酸类化合物混合标准中间溶液（4.3.2） 0.10mL.0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL至10mL棕色容量瓶中，用磷酸-甲醇溶液（4.1.4)定容 至刻度，配制成绿原酸类化合物系列混合标准工作溶液。现用现配。 4.4滤膜：0.45μm，水相。 5仪器和设备 5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 5.2天平：感量0.01mg和0.001g。 5.3咖啡磨：适用于磨碎焙炒的咖啡豆。 5.4嵌齿轮磨：装有冷却套；或者分析磨、装有刀片和冷却套；或者其他适于磨碎生咖啡豆的磨。 5.5样品筛：60目。 5.6恒温水浴锅。 6分析步骤 6.1取样 取样按NY/T1518的规定执行。 6.2样品制备与保存 用5.3或5.4所规定的设备研磨，直至试样通过60目的样品筛为止。混匀，装入密闭容器中，样品于 室温下保存。 6.3试样处理 称取试样0.5g（精确至0.001g）于200mL烧杯中，加人80mL磷酸溶液（4.1.3），沸水浴30min，不 时振摇。取出冷却至室温，转移至100mL容量瓶中，用磷酸溶液（4.1.3）定容至刻度，摇匀，静置。过 0.45μm水相滤膜（4.4)，待测。 6.4仪器参考条件 6.4.1高效液相色谱参考条件 a) 色谱柱：Cls柱（250mmX4.6mm，5μm）或相当者； b) 流动相：磷酸溶液（4.1.3）和甲醇，梯度洗脱，梯度洗脱程序见表1； 业标准 流速：1.0mL/min; c) d) 检测波长：327nm； e) 柱温：30℃； 进样量：10μL。 表1梯度洗脱程序 时间，min 磷酸溶液，% 甲醇,% 0.00~10.00 90 10 10.01~12.00 80 20 12.01~30.00 80 20 30.01~32.00 90 10 32.01~36.00 06 10 6.4.2色谱测定 准确吸取制备液（6.3）10μL，注入高效液相色谱仪，并用绿原酸类化合物系列混合标准工作溶液 （4.3.3）制作标准曲线，进行色谱测定。绿原酸类化合物混合标准溶液色谱图参见附录A。 7结果计算与表达 试样中被测绿原酸化合物以质量分数计，按式（1）计算。 2