ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3479—2019 饲料中氢溴酸常山酮的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of halofuginone hydrobromide in feeds- Liquid chromatography-tandem mass spectrometry 行业标准信息服务平台 2019-11-01实施 2019-08-01发布 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3479—2019 前 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起算。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。不文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）归口。 本标准起草单位：辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心。 本标准主要起草人：王丽娜、田晓玲、刘凯、张明、张秀芹、李欣南、李永才、刘笑、陈玉艳、张天姝。 行业标准信息服务平台 NY/T 3479—2019 饲料中氢溴酸常山酮的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了饲料中氢溴酸常山酮含量测定的液相色谱-串联质谱法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中氢溴酸常山酮的测定。 本标准的检出限为25ug/kg，定量限为50ug/kg 2规范性引用文件 件。凡是不注日期的引用文件其最新版本（包括所有的修改单） GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195 动物饲料试样的制备 3原理 S 试样用乙睛提取， 经过除脂净化后用液相色谱-串联质谱法测定内标法定量 4试剂或材料 除非另有规定， 本方法仅用分析纯试剂。 4.1水:GB/T6682 CENT 4.2乙睛：色谱纯 4.3甲醇：色谱纯 4.4正已烷。 4.550%甲醇溶液 量取甲醇50ml 加水至100mL，混勺 4.60.1%甲酸溶液金甲酸1 999mL水混勺 4.7 氢溴酸常山酮储 924-67-0，纯度≥ 99.0%)10mg（精确至0. mL容量瓶中用60%甲醇溶液溶解开定 刻度，摇匀。2℃~ 1g) 8℃下保存，有效期为3个月 4.8氢溴酸常山酮-13C内标储备溶液（200 L）：准确称取氢溴酸常山酮 C内标标准品10mg（精 确至0.00001g），至50mL容量瓶中，用50%甲醇落液溶解并定容至刻度，摇匀。2℃~8℃下保存，有效 期为3个月。 中，用50%甲醇溶液稀释并定容至刻度，摇匀。临用现配。 4.10氢溴酸常山酮-13C内标中间溶液（1000ng/mL：准确吸取250L氢溴酸常山酮-13C内标储备溶 液（4.8），至50mL容量瓶中，用50%甲醇溶液稀释并定容至刻度，摇匀。临用现配。 4.11标准曲线的配制：准确吸取氢溴酸常山酮标准中间溶液（4.9)和内标中间溶液（4.10)适量，用50% 甲醇溶液（4.5）稀释配制成氢溴酸常山酮浓度为20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、300ng/mL 的标准工作溶液，内标浓度均为50ng/mL。临用现配。 4.12微孔滤膜：孔径0.22μm，有机相。 5仪器设备 5.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。 1 NY/T 3479—2019 5.2天平：感量0.00001g和感量0.001g。 5.3离心机：转速不低于10000r/min。 5.4涡旋仪。 5.5氮吹仪。 6样品 按照GB/T20195的规定制备样品，粉碎后过0.42mm孔径的样品筛，混匀，装人磨口瓶中，备用。 7试验步骤 7.1提取 平行做2份试验。称取试样2g（准确至0.001g)于50mL离心管中，准确加人内标中间溶液（4.10) 100μL，加人乙（4.2)20mL，涡旋60s，于10000r/min离心5min，将全部上清液转移至另一离心管 中，加人5mL正已烷（4.4），涡旋30s，于10000r/min离心5min。弃去上层溶液，将下层溶液50℃氮气 吹干，准确加人50%甲醇（4.5)溶液2mL溶解后，再加人5mL正已烷（4.4），涡旋30s，10000r/min离 心5min。弃去上层溶液，取下层溶液过0.22μm滤膜过滤，上机测定。 7.2测定 7.2.1液相色谱参考条件 色谱柱：C18，柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.7μm，或其他性能相当者。 柱温：40℃。 进样量：10μL。 流速：0.3mL/min。 流动相：A为甲醇（4.3)；B为0.1%甲酸水溶液（4.6)，梯度洗脱程序见表1。 表1梯度洗脱程序 时间，min A,% B,% 0.00 95 1. 00 5 95 3. 00 95 5 3.50 95 5 5.00 标准信息服务平台 5 95 7.2.2质谱参考条件 离子源：电喷雾离子源。 监测方式：多反应监测。 扫描方式：正离子扫描。 电离电压：3.2kV。 离子源温度：120℃。 雾化气温度：350℃。 锥孔气流速：50L/h。 雾化气流速：650L/h。 药物定性定量离子对、碰撞能量见表2。 表2定性定量离子对、碰撞能量 被测物名称 定性离子对,m/z 定量离子对，m/z 碰撞能量，eV 414.0>119.5 20 氢溴酸常山酮 414.0>138.2 414.0>138.2 20 氢溴酸常山酮-13C内标 420.0>138.2 420.0>138.2 20 2