ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3473—2019 饲料中纽甜、阿力甜、阿斯巴甜、甜蜜素、 液相色谱- 安赛蜜、糖精钠的测定 串联质谱法 Determination of neotame,alitame,aspartame,sodium cyclamate, acesulfame and sodium saccharin in feeds- Liguid chromatography-tandem mass spectrometry 业标准信息服务平台 2019-11-01实施 2019-08-01发布 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3473—2019 前 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规购起章。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）归口。 本标准起草单位：辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心。 本标准主要起草人：于家丰、田晓玲、郝立忠、陈玉艳、张天姝、杨慧杰、吕晓惠、李晶、纪源、孙玉飞。 行业标准信息服务平台 I NY/T 3473—2019 饲料中纽甜、阿力甜、阿斯巴甜、甜蜜素、安赛蜜、 糖精钠的测定液相色谱-串联质谱法 1范围 方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料及精料补充料中纽甜、阿力甜、阿斯巴甜、甜蜜素、安赛 蜜、糖精钠的测定。 PUB 精钠的检出限为2.5mg/kg，定量限为5.0mg/kg 0 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文 件，其最新版本（包括所有的修改单）适用厅本文件 GB/T6682 分析实验室 用水规格和试验方法 动物饲料 GB/T20195 试样的制备 A 3原理 R 试样经提取后，醋酸钻沉淀蛋白经TILB固相萃取小柱净化后：供液相色谱串 仪测定，基质匹 工 配标准曲线，外标法定量。 4试剂或材料 方法仅用分析纯试剂。 除非另有规定 本 4.1水：GB/T6682 4.2乙：色谱纯。 4.3饱和醋酸铅溶液：不 4.40.2%甲酸溶液：准确移取甲酸1.0ml 小水定容全 至500mL，混习。 4.50.1%甲酸溶液：准确移取甲酸1.0m加水定容至1000mL，混勺 4.60.1%甲酸乙腈溶液：准确移取甲酸1.0mL，加乙腈定容至1000mL，混匀。 4.7纽甜（CAS号：165450-17-9）、阿力甜（CAS号：808） （CAS号：68476-78-8）、安赛蜜（CAS号：33665-90-6）、糖精钠（CAS号：128-44-9）：纯度均不少于99.0%。 4.8标准储备溶液（1mg/mL）：准确称取对照品纽甜、阿力甜、阿斯巴甜甜蜜素、安赛蜜、糖精钠各50 mg（精确至0.01mg)分别置于50mL容量瓶中，用0.2%甲酸溶液（4.4)溶解定容。2℃~8℃保存，有效 期6个月。 4.9标准中间溶液I（10mg/L）：移取纽甜、阿力甜、阿斯巴甜、甜蜜素、安赛蜜储备溶液（4.8)100μL置 于10mL容量瓶中，用0.2%甲酸溶液（4.4）定容，摇匀。2℃~8℃冷藏保存，有效期为3个月。 4.10标准中间溶液Ⅱ（50mg/L)：移取糖精钠储备溶液（4.8)500μL置于10mL容量瓶中，用0.2%甲 酸溶液（4.4)定容，摇匀。2℃～8℃冷藏保存，有效期为3个月。 4.11HLB固相萃取小柱：3mL/60mg，亲水亲脂平衡性的固相小柱或其他性能相当者。 4.12滤膜：0.22μm，水系。 1 NY/T3473—2019 5仪器设备 5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾电离源。 5.2旋转蒸发仪。 5.3氮吹仪。 5.4离心机：转速不低于7000r/min。 5.5涡旋振荡器。 5.6超声波清洗机。 5.7天平：感量为0.00001g和感量为0.001g。 6样品 按GB/T20195制备试样，全部通过0.42mm试验筛，混匀，装入密闭容器中，备用。 7试验步骤 7.1提取 平行做两份试验。称取2g（精确到0.001g）试样于50mL离心管中，准确加人0.2%甲酸溶液（4.4) 19mL和饱和醋酸铅溶液（4.3)1mL，充分振荡15min，超声提取15min，然后于7000r/min离心10 min，上清液备用。 7.2净化 固相萃取小柱依次用3mL乙腈、3mL0.2%甲酸溶液（4.4）活化。准确吸取3mL上清液（7.1)加到 小柱上，用3mL0.2%甲酸溶液（4.4）淋洗，减压抽干2min，用6mL乙腈洗脱，收集洗脱液，于50℃下旋 转蒸发或氮吹至干，准确加入0.2%甲酸溶液（4.4）3mL溶解，过0.22μm滤膜后，上机测定。 7.3基质匹配标准曲线系列溶液的制备 取基质相近的空白试样，按照7.1与7.2的规定制备空白基质溶液，用标准中间溶液I和标准中间溶 液I适量，制备基质匹配标准系列。其中，糖精钠浓度为0.5mg/L、1mg/L、2.5mg/L、5mg/L、25mg/ L、50mg/L;其他浓度均为0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L、1mg/L、5mg/L、10mg/L。 7.4测定 7.4.1液相色谱参考条件 色谱柱：Ci8柱，柱长100mm，内径2.1mm，粒度1.7um，或其他性能相当者。 柱温：40℃。 进样量：5uL。 流速：0.3mL/min。 流动相：A为0.1%甲酸溶液，B为0.1%甲酸的乙腈溶液，梯度洗脱程序见表1。 表1流动相梯度条件 时间，min A,% B,% 0 95 5 1. 0 S6 5 7.0 5 7. 1 95 5 10 95 5 7.4.2质谱参考条件 离子源：电喷雾离子源。 扫描方式：负离子模式。 2