ICS 65.120 B46 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3480—2019 饲料中那西肽的测定 高效液相色谱法 Determination of nosiheptide in feeds- High performance liquid chromatography 行业标准信息服务平台 2019-08-01发布 2019-11-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 MY/T3480—2019 品标准 前 国农 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SACMTC76）归口。 本标准起草单位：浙江省兽药饲料监察所、浙江汇能生物股份有限公司。 本标准主要起草人：陆春波、林仙军、陈慧华、罗成江、周芷锦、包爱情、周志强、陈贵才、王贤玉。 1 NY/T 3480—2019 饲料中那西肽的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了饲料中那西肽组分A的高效液相色谱测定法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中那西肽组分A的测定。 本标准方法的检出限为0.2mg/kg，定量限为0.5mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 3原理 试样中的那西肽组分A用乙二胺四乙酸二钠溶液和N，N-二甲基甲酰胺提取，离心后采用高效液相 色谱仪-荧光检测器进行测定，并用外标法定量。 4试剂或材料 除特殊注明外，所用试剂均为分析纯，水应符合GB/T6682中一级水的规定；溶液按照GB/T603的 规定配制。 4.1乙睛：色谱纯。 4.2N,N-二甲基甲酰胺。 4.3那西肽标准品（以那西肽组分A计，含量≥88.6%）。 4.4磷酸溶液：量取磷酸0.25mL加水至1000mL，摇匀。 4.5乙二胺四乙酸二钠溶液（0.2mol/L）：取乙二胺四乙酸二钠7.44g，加水溶解并稀释至100mL。 4.6流动相：取磷酸溶液（4.4)570mL，加乙腈（4.1)430mL，摇匀。 4.7标准储备液：称取那西肽标准品（4.3)约25mg(精确至0.01mg)，置25mL棕色量瓶中，用N,N-二 甲基甲酰胺配成浓度为1mg/mL的标准储备液，置一20℃保存，有效期为6个月。 4.8标准工作液：准确移取1mL标准储备液（4.7)于100mL棕色量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺（4.2） 稀释至刻度，摇匀。该溶液浓度为10μg/mL,置4℃保存，有效期为7d。 4.9标准系列溶液：分别吸取一定量的标准工作液（4.8），用N,N-二甲基甲酰胺（4.2)稀释成浓度为 0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.5μg/mL、2.5μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL的标准系列工 作溶液。现用现配。 4.10有机滤膜：0.45μm。 5仪器设备 5.1高效液相色谱仪：配有荧光检测器。 5.2离心机：转速8000r/min。 5.3分析天平：感量0.01mg、1mg。 1 NY/T3480—2019 5.4超声波清洗器。 6样品 按GB/T14699.1的规定抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取样。按照GB/T20195的规定 将饲料样品粉碎，过0.45mm孔径试验筛，混匀后装人密闭容器中，避光保存，备用。 试验步骤 警示：整个实验过程中，避免强光直接照射，试样提取和进样检测应在12h内完成。 7.1提取 称取2g试样（精确至1mg），置于50mL离心管中，加人乙二胺四乙酸二钠溶液（4.5）1.0mL，再加 中间摇匀3次；取出，于8000/min 10），测定。 7.2液相色谱参考条件 色谱柱：Cis柱，柱长 250 流动相：见4.6。 柱温：30℃。 进样量：20μL 流速：1.0ml /min 荧光检测器条件 激发波 nm 7.3定性、定量测定 A 9）及试样溶液（）测定，以色谱峰保留时间定性，以色谱峰面积响应值做单 当试样的 超过线性范围时需用N，N二甲基甲酰胺（4.2稀释后重新测 点或多点校准定量 定，直至上机液浓度 王标准曲级 那西肤组 A标准浴液色 C 试验数据处理 8 M 试样中那西肽组 Y计，数值以毫 表示按武（1)计算。 量以质 充每于克(mg/kg） GRI V (1) 式中： 标准溶液中那西肽组分 的度：单位为微克每毫升（ug/mL Cs A 试样溶液中那西肽组分A峰的峰市 A峰的峰面天 A, 标准溶液中那西肽组 试样质量，单位为克（g） m V 试样定容体积，单位为毫升（mL） 稀释倍数。 平行测定结果用算术平均值表示，保留3位有效数字。 9 精密度 在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一被测对象相互 独立进行测试获得的2次独立测试结果的绝对差值不大于这2个测定值的算术平均值的15%，以大于 15%的情况不超过5%为前提。 2