ICS65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3478—2019 饲料中尿素的测定 Determination of urea in feed 行业标准信息服务平台 2019-11-01实施 2019-08-01发布 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3478—2019 前 业 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起算 本标准由农业农村部农产品质量安全监管司提出。V 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）归口。 本标准起草单位：新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、农业农村部农产品质量监督检验 测试中心（乌鲁木齐）。 尼鸭尔 、王星、张继军 服务平台 NY/T 3478—2019 饲料中尿素的测定 1范围 本标准规定了饲料中尿素的测定方法。 本标准适用于饲料原料、配合饲料、浓缩饲料和精料补充料中尿素的测定。方法检出限为0.39mg/L。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 3原理 在乙醇和酸性条件下，尿素与对二甲胺基苯甲醛（DMAB)反应，生成的黄色复合物在420nm波长处 有最大吸收，且吸光度与尿素浓度呈线性关系，通过标准曲线计算试样中尿素的含量。 4试剂和溶液 除另有说明外，本法所用试剂均为分析纯，水符合GB/T6682二级水的规定。 4.1无水乙醇。 4.2盐酸。 4.3活性炭。 4.4对二甲胺基苯甲醛(DMAB)溶液：称取16.00gDMAB溶解于1000mL无水乙醇中，加100mL盐 酸（4.2）。储存在棕色试剂瓶中，常温下有效期1个月。 4.5乙酸锌溶液：称取22.00g乙酸锌[Zn(CH.CO)2·2HzO]用水溶解，加人3mL冰乙酸，并定容至 100 mL. 4.6亚铁氰化钾溶液：称取10.60g亚铁氰化钾[K,Fe(CN)。·3H2O]用水溶解，并定容至100mL，需临 用新配。 4.7磷酸盐缓冲液（pH=7.0）：称取3.403g无水磷酸二氢钾（KHPO）和4.355g无水磷酸氢二钾 （K,HPO4），分别溶于约100mL无二氧化碳水中，将上述2种溶液转移至1000mL容量瓶中，加水定容 至刻度。 4.8尿素标准溶液 4.8.1尿素标准储备液（10mg/mL）：称取5g尿素（优级纯，精确至01mg）溶解于水中，转移至500 mL容量瓶中，加水定容至刻度。该储备液于4℃保存2个月。 4.8.2尿素标准工作液I（1.0mg/mL)：临用前吸取10.00mL尿素储备液，置于100mL容量瓶中，加 水定容至刻度。 4.8.3尿素标准工作液Ⅱ（0.1mg/mL）：临用前吸取10.00mL尿素标准工作液I，置于100mL容量 瓶中，加水定容至刻度。 4.9滤纸：中速。 5仪器和设备 5.1分析天平：感量0.1mg。 NY/T3478—2019 5.2 分光光度计或紫外-可见分光光度计：配备10mm、30mm比色皿。 5.3振荡器。 5.4涡旋混合器。 5.5样品粉碎机。 5.6分样筛：孔径0.45mm。 样品的采集与制备 6.1采样 按GB/T14699.1的规定采取具有代表性的伺料样品1000g。 6.2试样的制备 密闭容器中备用。 7分析步骤 7.1试样提取 称取约1.0g样品（精确） 1.0mg/置厂100mL容量瓶中加人0.5 ，加水约70mL，摇匀， 放置10min，再分别加人5 L乙酸锌浴液（4.5）和5mL亚铁氰化钾溶液（4 定容至刻度，摇匀，静置10 min。用中速滤纸过滤：奔去初滤液，收集续滤液作 同时做试剂 空白。 A 7.2.1高含量尿素标准曲线 mg/ml的尿素标准主作液（4.8.2）0 mL、2.0 mL、 准确吸取浓 mLC 3. 0 mL.5. 0 mL g 10 0 mg尿素)分 别置于25mL 管中, ，加人5.0m磷酸盐缓冲液C 比色 甲胺基苯甲醛 (DMAB)溶液(4 作液的溶液为参 比，于420nm波 以尿素含量为横坐标、吸光度为纵坐标 制标 曲线。尿素含量在 1.0%以上的试样 高合量标准曲线进行计算， 7.2.2低含量尿素标准曲线 尿素含量在1.0%以下的试样，需 含量标准曲线进行计算 吸取浓 0. 1 mg/mL的尿素标 准工作液Ⅱ（4.8.3)0mL mL、4. .8.0ml 10mL（相当 mg.0.20 mg.0. 40 mg、 0.60mg.0.80mg、1.00mg尿素）分别置于 比色 同7.2.1加入试剂溶液。放置20min，用 30mm比色血，以0mL标准工作液的溶液为参比，于420nm波长处测定吸光度。以尿素含量为横坐标、 吸光度为纵坐标绘制标准曲线。 7.3试样测定 准确吸取试样溶液（7.1)5mL～10mL置于25mL比色管中，同7.2.1加人试剂溶液，以试剂空白为 参比，进行显色和比色测定。测得试样的吸光度，在标准曲线上由吸光度查得尿素浓度，通过计算，即得试 样的尿素含量。 8结果计算及表示 8.1 结果计算 试样中的尿素含量X以质量百分数（%）表示，按式（1）计算。 X 100 (1) V1 1000 2