ICS65.020.01 B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3346—2019 马铃薯抗青枯病鉴定技术规程 Technical code of practice for evaluation of potato resistance to bacterial wilt 行业标准信息服务平台 2019-01-17发布 2019-09-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T 3346—2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所。 本标准主要起草人：杨宇红、谢丙炎、振川、凌键、李彦。 行业标准信息服务平台 I NY/T 3346—2019 马铃薯抗青枯病鉴定技术规程 1 范围 本标准规定了马铃薯抗青枯病（bacterialwilt)鉴定方法与评价标准。 本标准适用于马铃薯（SolanumtuberosumL.）品种和材料对青枯病抗性的室内鉴定及评价。 2规范性引用文件 本文件 NY/T 1858.4 SN/T 1135.9 3术语和定义 NY/T 1858 定的以 下列术语和义适用 S 3. 1 马铃薯青枯病 Potato bacterialwil 菊Rl 由茄科劳尔氏 侵染 株引起的一种全 维鲁束光 株性萎為的细菌 儿附录A 3.2 U 生理小种 physiological. 病原物种内在 形态上天 4试剂与材料 除非另有说明 化订 4.1 TTC(2,3,5 称取 1 g TTC溶 灭菌，保 4℃的棕色试剂 瓶中备用。 4.2培养基 培养基包括青枯菌培养基和马 *基的配 配制方法见附录B。 4.3对照材料 以马铃薯‘米拉或?合作-88'等感病品种为感病对照 4.4育苗基质 直接购买商品化蔬菜育苗基质。亦可将草炭、蛭石和菜田土按体积2：1：1的比例混合均匀，于 （134士1)℃湿热灭菌1h。 4.5其他用品 培养血、离心管、枪头、冻存管、手术刀、剪刀、移植环、烧杯、量筒、试剂瓶、锥形瓶、酒精灯、组培苗培 养盒、育苗钵等。 52 仪器设备和设施 恒温光照培养箱、高压灭菌锅、移液器、电子天平、超净工作台、冰箱、人工接种鉴定室等。 1 NY/T3346—2019 6材料育苗 育苗包括试管苗培养和盆栽育苗，见附录C。 7接种体制备 7.1青枯病菌分离、纯化 按照SN/T1135.9的规定进行青枯病菌的分离、纯化、鉴定和保存。 7.2接种体繁殖、制备 选择马铃薯青枯菌的优势小种生理小种3号作为接种病原菌，小种鉴定方法参见附录D。用接种 环蘸取菌液在TTC培养基平板上划线，在28℃恒温培养箱中培养48h后，挑取边缘乳白色、中间部位 淡红色、流动性好的毒性单菌落，移入青枯菌液体培养基中，28℃200r/min振荡培养16h～18h，加适 量无菌水配成接种的病菌悬浮液。 8鉴定方法 8.1试管苗接种鉴定 8.1.1接种时期 在组培苗培养基中培养3周的试管苗。 8.1.2接种浓度 约 1X108CFU/ mL(OD600 =0. 1)。 8.1.3接种方法 采用伤根接种法。选用生长一致的马铃薯试管苗3盒，试管苗繁殖见C.1.3，使用手术刀片于无菌 环境下围绕植株根部在培养基划“#”伤根，随后每盒试管苗注人接种菌液5mL。每份材料设3个重 复，每重复不少于10株苗。 8. 1. 4接种后管理 接种后置于（28士1)℃的光照培养箱内，在每日光照16h、黑暗8h条件下培养。 8.1.5病情调查 8.1.5.1调查方法 从接种后第6d开始，每隔2d观察鉴定材料的发病情况，待感病对照达到相应病级后，调查每份鉴 定材料接种株发病情况，根据表1中的病害症状描述，逐份材料逐株进行调查，记载接种株病情级别，按 式(1)计算病情指数（diseaseindex，DI)。 Z(sXn) DI = 服务平台 X100 .(1) NXS 式中： DI 病情指数； 各病情级别数值与相对应的各病情级别植株数乘积的总和； 各病情级别数值； n 各病情级别的病株数，单位为株； N 调查的总株数，单位为株； S 病情级别的最高数值。 - 8.1.5.2病情级别划分 试管苗植株病情分级及其对应的症状描述见表1。 2