ICS65.020.01 B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3427—2019 棉花品种枯菱病抗性鉴定技术规程 Technical code of practice for identification of cotton variety resistance to Fusarium wilt 行业标准信息服务平台 2019-01-17发布 2019-09-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T 3427—2019 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由农业农村部种业管理司提出并归口。 本标准起草单位：全国农业技术推广服务中心、中国农业科学院棉花研究所。 本标准主要起草人：张毅、朱荷琴、冯自力、张芳、冯鸿杰、魏锋、赵丽红、师勇强。 行业标准信息服务平台 I NY/T 3427—2019 棉花品种枯萎病抗性鉴定技术规程 1范围 本标准规定了棉花品种对枯菱病L病原菌：尖孢镰刀菌萎焉专化型FusariumoaysporumSchlect- end:Fr.F.sp.vasinfectum(Atk.）W.C.Snyd。&H.N.Hans.J抗性的人工接菌鉴定技术方法和 程序。 本标准适用于棉花品种区域试验枯菱病抗性室 2规范性引用文件 RD 下列文件对于本文 件的应 注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文 件真度新 有的修改单 活 GB 4407.1 经济作 物种子 分：纤维类 棉花抗病 GB/T 22101 专重性评价投术规范 第 部分粘要病 S 3术语和定义 下列术语利 义适用于 文件 定 3.1病株率 衡量发病植株 多少的 本标准中病 株率仅作为辅助指 3.2病情指数 disease indes 衡量发病株率和严重度的纳 的理论 精级数 部调查 全最高总病级数 EN 的比较相对数表示 作DI 3.3病情指数校正 correction coefticient of disease index 系数 女使人标佳化的 修正病情指数 （50.0)上） 对照 病情指数的比 ITT 值表示，记作K。 3.4相对病情指数 relative diseaseg in 为消除地区间、年度 批次间鉴定 而对病情指数进行标准 化的指标，用供试棉花品种的病情指数与病情 乘积表示，记 RDI 4鉴定条件要求 4.1病原菌培养所需仪器设备 恒温摇床、恒温培养箱、超净工作台、高压灭菌锅、冰箱、培养皿、试管、剪刀、镊子、广口瓶、酒精 灯等。 4.2鉴定温室所需条件 鉴定温室应具备控制温度在20℃～28℃，能够随时通风，不同部位光照一致。 5鉴定前准备 5.1病原菌选择与培养 5.1.1病原菌选择 1 NY/T3427—2019 选用棉花枯萎病菌7号小种；如当地的枯萎病菌小种相对于7号小种为优势小种，则选择当地优势 小种作为鉴定用病原菌。 5.1.2病原菌培养 在超净工作台上，将保存的棉花枯萎病菌试管斜面菌种，转接到马铃薯琼脂培养基（PDA)平板上， 置25℃下培养6d。挑取菌落边缘2mm的新鲜菌块，接种到查比克（Czapek）液体培养基中，置25℃ 下，150r/min，黑暗培养6d备用。吸取15mL上述菌液转接至装有玉米沙粒培养基的聚丙烯菌种袋 中，混匀后置25℃培养箱中静置培养7d，待枯萎病菌的菌丝布满后，取出培养物，自然风干备用。 培养基配制见附录A。 5.2带菌土准备及纸钵制作 将沙壤土过筛（孔径5mm)后，和泥炭土、沙子分别经0.1MPa、121℃、湿热灭菌30min，按3：1：1 混匀称重，加入总干重0.8%的枯萎病菌玉米沙粒培养物，混合均匀。 用干净的纸做直径6cm、高10cm的纸钵，均匀排列在塑料盘（30cmX20cm×9cm）中，每盘3排4 列，将已混均匀的带菌土装人纸钵中，至3/4高度，待用。 5.3对照品种选择 选用感病对照和抗病对照各1个。感病对照要求高度感枯萎病的常规棉花品种或材料，选择标准 为规定接种量及适宜环境条件下病情指数能达到50.0左右，且感病性稳定；抗病对照选用抗枯萎病常 规品种，规定接种量及适宜环境条件下病情指数在10.0以下，且抗病性稳定。为减缓抗、感对照的抗性 变异，可将对照品种在无病地隔离繁殖，冷库保存，一次繁殖，供5年以上使用。 6鉴定程序 6.1试验材料处理 鉴定的棉花材料应为硫酸脱绒未包衣的种子，符合GB4407.1的要求。 6.2试验材料种植 播种前，依次从纸钵空隙间均匀浇水，每盘300mL；随后将鉴定品种的种子摆放于纸钵中，每钵8 粒～10粒。每品种3次重复，每重复1盘12钵；然后用灭菌沙子覆盖至与钵体平齐。 6.3温室管理 播种后，温度控制在23℃～28℃；出苗后，及时疏苗，每钵留苗3棵～5棵；土壤湿度控制在60%～ 80%。 6.4病情调查记载 棉花播种出苗后，实时监测感病对照的发病情况，当感病对照的病情指数达到35.0以上时，进行全 面病情调查，每3d～5d1次，调查2次～3次，具体发病症状参见B.3；病情调查表见附录C；病情分级 标准见表1。 表1枯萎病苗期分级标准 级别 1片真叶期 2片真叶期 0 棉株健康，无病状 棉株健康，无病状 1片子叶表现病状，真叶不显病状 1 1片～2片子叶表现病状，真叶不显病状 2 2片子叶表现病状 子叶和1片真叶表现病状 3 1片真叶表现病状 2片真叶表现病状 全部叶片表现病状，严重时叶片脱落，顶心枯死 全部叶片表现病状，严重时叶片脱落，顶心枯死 4 7结果计算 7.1病株率 病株率（Di）按式（1)计算。 2