ICS 11.220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1187—2019 代替NY/T681—2003,NY/T1187—2006 鸡传染性贫血诊断技术 Diagnostic techniques for chicken infectious anemia 行业标准信息服务平台 2019-08-01发布 2019-11-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T 1187—2019 本标准代替NY/T681—2003《鸡传染性贫血诊断技术》和NY/T1187—2006《鸡传染性贫血病毒聚 合酶链反应试验方法》。与NY/T681—2003、NY/T1187—2006相比，除编辑性修改外主要技术变化如 下： 增加了实验室检测技术部分荧光聚合酶链反应试验的检测方法。 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出。 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181)归口。 本标准起草单位：中国动物疫病预防控制中心、山东农业大学。 本标准起草人：王传彬、顾小雪、赵鹏、张硕、韩雪、任志浩、蒋菲、宋晓晖、杨林、刘洋、刘玉良、王睿男、 毕一鸣。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： -NY/T681—2003; -NY/T1187—2006。 行业标准信息服务平台 NY/T 1187—2019 鸡传染性贫血诊断技术 1 范围 本标准规定了鸡传染性贫血（CIA)临床诊断和病毒分离与鉴定、酶联免疫吸附试验、免疫酶试验、聚 合酶链反应试验和荧光聚合酶链反应试验及综合判定技术。 本标准适用于鸡传染性贫血的诊断、监测、产地检疫及流行病学调查。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫 NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 鸡传染性贫血 chicken infectious anemia 鸡贫血因子病 由鸡贫血病毒引起的维鸡再生障碍性贫血、全身淋巴组织萎缩、皮下和肌肉出血为特征的一种免疫抑 制性疾病。 4缩略语 DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid) dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleosidetriphosphate） PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction） Taq 酶:Taq DNA聚合酶(Taq DNA polymerase) 5临床诊断 5.1流行病学 5.1.1本病各品种、年龄的鸡均易感，自然发病多见于2周龄~4周龄鸡。 5.1.2成年鸡或有母源抗体的维鸡感染无明显临床症状。 5.1.3种鸡感染后，可通过种蛋垂直传播给下一代。 5.1.4当有马立克氏病、传染性法氏囊病、禽网状内皮组织增殖症等免疫抑制性疾病发生时，维鸡对鸡传 染性贫血病毒(CIAV)的易感性增高，发病早且严重。 5.2临床症状 维鸡感染CIA的主要临床特征是贫血、病鸡精神沉郁、虚弱、消瘦，聚堆及行动迟缓，羽毛蓬乱，喙、肉 、面部和可视黏膜苍白，羽毛囊有淤血和出血性病灶，生长不良。 5.3病理变化 5.3.1病鸡表现再生障碍性贫血、消瘦，骨髓被脂肪组织取代呈黄白色，肌肉及内脏器官苍白，肝脏、肾脏 1 NY/T 1187—2019 肿大并褪色，血液稀薄，凝血时间延长，红细胞压积下降。 5.3.2病鸡表现全身性淋巴组织萎缩，胸腺、法氏囊、脾脏和盲肠扁桃体以及其他组织内淋巴细胞严重缺失。 5.4结果判定 符合5.1的流行病学特征，病鸡出现5.2临床症状和5.3中的病理变化，可判为鸡传染性贫血疑似病 例，应进行实验室确诊。 6 实验室诊断 6.1病原分离鉴定 6.1.1试剂或材料 6. 1.1.2新生牛血清。 6. 1. 1. 3 6. 1. 1. 4 淋巴细胞 6.1.1.5标准阳性血清：用CIAV抗原免疫SPF鸡制备的血清 6. 1. 1. 6 鸡血清。 6. 1. 1.7 6. 1. 1. 8 吸管 6.1.1.9离心机及离心管 6. 1. 1. 10 研磨器械R 6. 1. 1. 11 可调移液器（最大量程为2mL20μL、200L1000L）及相应吸 6. 1. 1. 12 45μm微孔滤膜 0. 6.1.2仪器设备 6.1.2.1二氧化碳培养箱 6.1.2.2恒温水浴箱 6.1.2.3普通冰箱及 低温沙 6.1.2.4倒置显微镜。 6.1.3样品 按NY/T541无菌采集病鸡胸腺、牌脏、肠扁桃体、肝脏、肺脏、法氏 囊等器官组织1g~2g， 研磨后用无血清DMEM（高糖）培养基制成20%组织悬浮液，以3000g离心30min。取上清液，70℃水 浴处理5min后加等量（体积比）10%三氯甲烷室温处理15min，10000g离心20min，取上清液用于CI- AV分离。 6.1.4操作方法 6.1.4.1用MDCC-MSB1细胞在含15%新生牛血清的DMEM（高糖）培养基、39℃和5%二氧化碳恒温 培养箱中培养。每2d~3d传代一次，细胞长至2×105个/mL~5×105个/mL。 6.1.4.2将0.1mL处理好的组织悬浮液接种上述培养的MDCC-MSB1细胞，在39℃和5%二氧化碳环 境下培养48h，观察结果。CIAV感染后的细胞病变表现为细胞体积增大，随后溶解。若第一次接种未出 现细胞病变，应将细胞培养物冻融后盲传三代。 6.1.4.3将出现病变的细胞用6.3、6.4、6.5的任意一种方法进行鉴定。 6.1.5结果判定 a）CIAV分离鉴定阳性：出现病变的细胞用6.3、6.4、6.5的任意一种方法检测为阳性。 CIAV分离鉴定阴性：样品接种细胞后盲传三代均无细胞病变，或者用6.3、6.4、6.5三种方法检 测均为阴性，则判为阴性。 2