ICS 11.220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 575—2019 代替NY/T575—2002 牛传染性鼻气管炎诊断技术 Diagnostic techniques for infectious bovine rhinotracheitis 行业标准信息服务平台 2019-08-01发布 2019-11-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T575—2019 前言 全国农业食品标准 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 公共服务平台 修改外主要技术变化如下： 增加了引言（见引言）； 修改了范围（见第1章）； -增加了规范性引用文件（见第2章）； 增加了缩略语（见第3章）； 修改了病毒鉴定中和指数的判定标准（见4.4)； -增加了实时荧光PCR试验（见第7章）； 一增加了细胞培养液的配制和实时荧光PCR试验过程防止交叉污染的措施（见附录A和附录C）。 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出。 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181）归口。 本标准起草单位：中国动物卫生与流行病学中心，华中农业大学。 本标准主要起草人：李晓成、郭爱珍、张志、李庆妮、吴发兴、张芳、胡长敏、刘爽、陈颖钰、董雅琴、陈曦、 张慧、姜传文、侯桂先、刘瑞宁、陈焕春。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： -NY/T575—2002 行业标准信息服务平台 I NY/T575—2019 引言 牛传染性鼻气管炎（Infectiousbovinerhinotracheitis，IBR）是家养牛和野牛的一种病毒性传染病，病 原是牛传染性鼻气管炎病毒（Infectiousbovinerhinotracheitisvirus，IBRV），学名为牛疱疹病毒I型（Bo- vineherpesvirus1,BoHV-1)。该病广泛分布于世界各地。世界动物卫生组织（OIE)将其列为牛的法定 报告疫病，我国将其列为二类动物疫病。该病死亡率较低，许多感染牛呈亚临床症状经过，往往由于细菌 继发感染导致更为严重的呼吸道疾病。 本标准参考世界动物卫生组织（OIE《陆生动物诊断试验和疫苗手册》（2017年OIE官方网站在线 2.4.12）的内容，转化了实时荧光 版）中关于牛传染性鼻气管炎/牛传染性化脓性外阴阴道炎（Chapter PCR诊断方法并引人到本标准中 TURAL 务平台 II NY/T5752019 牛传染性鼻气管炎诊断技术 1范围 本标准规定了牛传染性鼻气管炎的诊断技术要求。 本标准规定的病毒分离鉴定适用于牛疱疹病毒I型的分离鉴定；微量血清中和试验和酶联免疫吸附 试验适用于牛群牛传染性鼻气管炎的流行病学调查、监测和诊断；实时荧光PCR试验适用于快速检测牛 疱疹病毒I型感染。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 BoHV-1:牛疱疹病毒I型(bovine herpesvirus type1) CPE：细胞病变(cytopathiceffect) Ct值：循环阈值（cyclethreshold） IBR：牛传染性鼻气管炎（infectiousbovinerhinotracheitis） MDBK：牛肾细胞系（madin-darbybovinekidney cell line） TCIDso：组织培养半数感染量（50%tissuecultureinfectivedoses） 4病毒分离鉴定 4.1材料 4.1.1试剂 4.1.1.1青霉素-链霉素溶液（青霉素10000U/mL，链霉素10000μg/mL)。 4.1.1.2无BoHV-1抗体新生牛血清。 4.1.1.3DMEM培养液、细胞生长液和细胞维持液（配制方法见附录A）。 4.1.1.40.25%EDTA胰酶。 服务平台 4. 1. 1.5BoHV-1标准阳性血清和BoHV-1标准阴性血清。 4.1.1.6MDBK细胞或睾丸原代或睾丸次代细胞。 4.1.2器材 4.1.2.1组织匀浆机。 4.1.2.2离心机。 4.1.2.3恒温二氧化碳培养箱。 4.1.2.4倒置显微镜。 4.1.2.5无菌棉拭子。 4.1.2.60.22μm孔径滤器。 4.1.2.7微量可调移液器。 1