ICS 11. 220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 680—-2003 禽白血病病毒p27抗原 酶联免疫吸附试验方法 Enzyme-linked immunosorbent assay for avian leukosis virus p27 antigen 行业标准信息服务平 2003-10-01实施 2003-07-30发布 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 680—2003 前 言 本标准的附录 A为规范性附录。 本标准由农业部畜牧兽医局提出并归口。 本标准起草单位：农业部兽医诊断中心。 本标准主要起草人：陈西钊、苏敬良、王宏伟、田克恭、吴清民、王传彬。 行业标准信息服务平 NY/T680--2003 禽白血病病毒p27抗原 酶联免疫吸附试验方法 1范围 本标准规定了禽白血病病毒(ALV)p27抗原酶联免疫吸附试验方法。 本标准适用于检测鸡蛋蛋清以及鸡胚组织细胞培养物中的ALVp27蛋白抗原。 2p27抗原酶联免疫吸附试验 2.1试验材料 2. 1.1试剂 2.1.1.1抗p27蛋白抗体：应用提纯的禽成髓细胞性白血病病毒p27蛋白免疫家免制备。 2. 1. 1. 2 阳性抗原：含鸡白血病/肉瘤病毒群特异性p27蛋白抗原的鸡蛋清。 2. 1. 1. 3P 阴性抗原：无鸡白血病/肉瘤病毒群特异性p27蛋白抗原的SPF鸡蛋清。 2.1.1.4 酶结合物：辣根过氧化物酶标记的抗p27蛋白抗体。 2. 1. 1.5 磷酸盐缓冲液(PBS)：配制见第A.1章。 包被液：配制见第A.2章。 2.1.1.6 2. 1. 1. 7 洗涤液：配制见第A.3章。 2. 1. 1.8 样品稀释液：配制见第A.4章。 2. 1. 1. 9 底物溶液：配制见第A.6章。 2. 1. 1. 10 终止液：配制见第A.7章。 2.1.2器材 酶联检测仪； a) 聚苯乙烯板； b) c) 微量加样器，容量50μL～200μL； d) 37℃恒温培养箱。 2.1.3样品 2. 1. 3. 1 鸡蛋样品：将待检鸡蛋小的一端朝上放置，打碎蛋壳，用移液器无菌吸取蛋清，密装于灭菌小 瓶内。 2. 1.3.2 细胞培养物：用移液器无菌吸取细胞培养物，密装于灭菌小瓶内，4℃或30℃保存或立即送 检。试验前将送检样品统一编号，试验时不做稀释。 2.2操作方法 2.2.1用包被液将抗p27蛋白抗体作4000倍稀释，每孔100μuL加入96孔聚苯乙烯板中，4℃过夜。 2.2.2耳 取出包被好的聚苯乙烯板，将液体倒弃，每孔加250μL洗涤液漂洗三次，每次2min，甩干。 每孔加150μL质量浓度为1%的明胶封闭液，37℃反应60min。 2.2.34 2.2.4 重复2.2.2。 2.2.52 在A1、A，孔各加100μL标准阴性对照，As、A孔各加100uL标准阳性对照。 2.2.6) 将待检样品加入其他各孔，每个待检样本加两孔，每孔100uL，37℃反应60min。 2.2.7 重复2.2.2。 2.2.8 每孔加100μL工作浓度的辣根过氧化物酶标记的抗p27蛋白抗体，37℃反应60min。