ICS 11. 220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 569—2002 马传染性贫血病琼脂凝胶免疫扩散 试验方法 Agar gel immunodiffusion test for equine infectious anemia 行业标准信息服务平 2002-08-27 发布 2002-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 569—2002 前言 马传染性贫血病(equine infectious anemia，简称EIA)是马属动物以反复发作、贫血和持续病毒血 症为特征的传染性疾病，被世界动物卫生组织[World Organization for Animal Health(英）,Office In- ternational des Epizooties（法）,OIE］列为B类疫病，我国农业部列为二类动物疫病。 本病是由反转录病毒科、慢病毒属的马传贫病毒(ELAV)引起的,经吸血昆虫传播。 本标准规定的琼脂凝胶免疫扩散试验（AGID)诊断方法，是根据OIE《诊断试验和疫苗标准手册》 (2000年版)和我国实际情况制定的，技术上一致。该法简便特异，在国际贸易中为指定的诊断方法。 本标准的附录 A 为规范性附录。 本标准由农业部畜牧兽医局提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。 本标准主要起草人：相文华、沈荣显。 行业标准信息服务平 NY/T 569—2002 马传染性贫血病琼脂凝胶免疫扩散 试验方法 1范围 本标准规定了马传染性贫血病的琼脂凝胶免疫扩散技术要求。 本标准适用于马传染性贫血病的诊断和检疫。 2琼脂凝胶免疫扩散试验 2.1材料准备 2.1.1抗原：检测用抗原按说明书使用。 2.1.2血清： 上的稀释仍保持阳性反应者为宜。小量分装，冻结保存。 b）被检血清：不含防腐剂和抗凝剂的被检马血清。 2.1.3pH7.20.01mol/L的磷酸盐缓冲液(PBS),配制方法见附录A（规范性附录）。 2.2操作方法 2.2.1制备琼脂板 2.2.1.1取优质琼脂1.0g，直接放人含有万分之一硫柳汞的100mL的PBS中，用热水浴溶化混匀。 2.2.1.2将直径90mm的平血放在水平台上，每平皿倒人热溶化琼脂液15mL～18mL，厚度约 2.5mm左右，注意不要产生气泡，冷凝后加盖，把平皿倒置，防止水分蒸发，放在普通冰箱中可保存两周 左右。 根据受检血清样品多少亦可采用大、中、小三种不同规格的玻璃板。10cm×16cm的玻璃板加注热 琼脂液40mL;6cm×7cm的加注11mL;3.2cm×7.6cm的加注6mL。 配成的琼脂液，可装瓶中用胶塞盖好，以防水分蒸发，待使用时，现溶化现制板。 2.2.2打孔 反应孔现用现打。在坐标纸上画好七孔型图案。把坐标纸放在带有琼脂板的平皿或玻璃板下面，照 图案在固定位置上用金属管打孔，将切下的琼脂片取出，勿使琼脂膜与玻璃面离动。抗原孔及外周孔孔 径均为5mm，孔间距3mm（见图1）。 5 图1七孔型 2.2.3滴加抗原和血清 在琼脂板上端写上日期及编号。在图1七孔型的中央孔加抗原，外周2、4、6孔加检验用标准阳性血 1