ICS_11. 220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 560—-2002 小鹅瘟诊断技术 Diagnostic techniques for gosling plague 行业标准信息服务平 2002-08-27发布 2002-12~01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 560-2002 前言 小鹅瘟又称鹅细小病毒（goose parvovlrus)病，或又称德兹西氏病(Derzsy's 病）,是雏鹅的一种急 性败血性传染病。我国和世界上所有养鹅的国家均有此病的流行发生。本病主要侵害三周龄以内维鹅， 多呈最急性和急性病病程而迅速致死。三周龄以上的雏鹅仅部分发病，并呈亚急性病程。本病一旦发生 流行常引起大批维鹅死亡，造成重大经济损失。 本病的病原称为小鹅瘟病毒，根据其病毒分类地位，又称鹅细小病毒。应用中和试验、琼脂扩散试验 等方法证明全国各地分离的毒株具有相同的抗原关系，即仅有一个抗原型。与匈牙利的Derzsy's病毒 株和番鸭细小病毒有密切抗原关系，而与哺乳动物和其他禽类的细小病毒没有抗原关系。据国内外有关 报道，本病病毒分离常用鹅胚和番鸭胚。鹅胚和番鸭胚原代细胞感染病毒后，用伊红-苏木素染色，可见 有CowdreyA型核类包涵体和合胞体的形成。用电镜或特异的鹅细小病毒抗血清中和试验能确定感染 细胞内病毒的存在。 本标准的附录A、附录B均为规范性附录。 本标准由农业部畜牧兽医局提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：扬州大学畜牧兽医学院。 本标准主要起草人：王永坤、严维巍、朱国强、周继宏、庄国宏。 行业标准信息服务平台 NY/T 560—2002 小鹅瘟诊断技术 1范围 本标准规定了小鹅瘟诊断技术要求。 本标准所规定的病毒分离方法适用于小鹅瘟病毒分离；琼脂扩散试验、中和试验和酶联免疫吸附 (ELISA)试验等血清学诊断方法适用于病毒分离株的鉴定、鹅群检疫、流行病学调查和免疫鹅群抗体水 平的检测。 2 病毒分离鉴定 2.1材料准备 2.1.1以无菌手术取患病维鹅或死亡维鹅的肝、胰、脾、肾、脑等内脏器官病料放置灭菌的玻瓶冻结保 存，作为病毒分离材料。 2.1.2先将病料组织剪碎、磨细，用灭菌生理盐水，或灭菌pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)作(1：5)~～ （1：10)稀释，经3000r/min离心30min，取上清液加人抗生素，使每毫升组织液含有2000IU青霉素 和2000μg链霉素，于37℃温箱作用30min，作为病毒分离材料。 2.1.3将上述离心的上清液按4：1加人分析纯三氯甲烷充分混匀后放置37℃温箱作用60min，或 2000μg链霉素，于37℃温箱作用30min，作为病毒分离材料。 2.2 病毒分离 ： 2.2.1鹅胚接种 将上述病毒分离材料接种5枚12日龄无小鹅瘟抗体的鹅胚，每胚尿囊腔接种0.2mL，置37℃～ 38℃孵化箱内继续孵化，每天照胚2～4次，观察9d，一般经5d～7d大部分胚胎死亡。72h以前死亡 的胚胎废弃，72h以后死亡的鹅胚取出放置4℃～8℃冰箱内过夜冷却收缩血管。用无菌手续吸取尿囊 液保存和作无菌检验，并观察胚胎病变。无菌的尿囊液冻结保存作传代及检验用。 2.2.2番鸭胚接种 将上述病毒分离材料接种5枚12日龄无小鹅瘟抗体的番鸭胚，每胚尿囊腔接种0.2mL，置37℃～ 38℃孵化箱内继续孵化，每天照胚2～4次，观察9d，一般经5d～7d大部分胚胎死亡。在72h以前死 亡的胚胎废弃，72h以后死亡的番鸭胚取出放置4℃～8℃冰箱内过夜冷却收缩血管。用无菌手续吸取 尿囊液保存和作无菌检验，并观察胚胎病变。无菌的尿囊液冻结保存作传代和检验用。 接种后7d内未见死亡的鹅胚或番鸭胚取出后入4℃～8℃冰箱内过夜冷却收缩血管。用灭菌手续 吸取尿囊液盲传一次。 2.2.3病变 由本病毒致死的鹅胚和番鸭胚具有相同的大体肉眼病变。绒尿膜增厚，全身皮肤充血，翅尖、趾、胸 部毛孔、颈、喙旁均有较严重出血点，胚肝充血及边缘出血，心脏和后脑出血，头部皮下及两肋皮下水肿。 2.3病毒鉴定 用鹅胚绒尿液分离病毒与已知抗小鹅瘟病毒标准血清，或抗小鹅瘟病毒单克隆抗体，在无小鹅瘟抗 1