ICS 65.120 HS B40/49 中华人民共和国海关行业标准 HS/T13—2006 牛、羊、鹿源性成分鉴定方法 实时荧光PCR方法 Identification of bovine, sheep, goat and deer-derived materials Real-timefluorescencePCRmethod 行业标准信息服务平台 2007-03-28发布 2007-04-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 55 HS/T13—2006 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由中华人民共和国海关总署关税征管司提出。 本标准由中华人民共和国海关总署政策法规司归口。 本标准起草单位：中华人民共和国大连海关 本标准主要起草人：尹兵、李大志、孙利。 行业标准信息服务平台 56 HS/T13—2006 牛、羊、鹿源性成分鉴定方法 实时荧光PCR方法 1范围 本标准规定了牛、羊、鹿（指牛、羊和鹿种属）源性成分产品使用实时荧光PCR定性分析方法的 DNA的提取、实时荧光PCR方法。 本标准适用于进出口含牛、羊、鹿源性成分产品的SYBRGreenI实时荧光PCR定性分析。 2总则 按照本方法规定提取样品的DNA，应用实时荧光PCR技术针对特异性牛、羊、鹿动物源性成分基 因片段进行扩增，对目的基因进行扩增，反应体系中加入SYBRGreenI嵌合荧光染料，通过检测目的 基因是否有荧光信号的增幅来判断样品中是否存在牛、羊、鹿动物源性成分，并通过测定扩增产物的 DNA融解温度判断反台动物源性成分的种类。 3术语、定义和缩略语 3.1术语和定义 下列术语和定义适用于本标准： 3. 1. 1 牛、羊、鹿源性成分bovine，sheep，goatanddeer-derivedmaterials 牛、羊、鹿种属特异性DNA片段。 3.1.2 PCRReal-TimeFluorescencePCR 实时荧光 3. 2 缩略语 下列缩略语适用于本标准： BSA牛血清白蛋白（bovineserumalbumin） dH,O 双蒸水（doubledistilledwater) DNTP 脱氧核糖核苷三磷酸（deoxyribonucleosidetriphosphale） EDTA 乙二胺四乙酸（ethylenediamineletraaceticacid） GuSCN 异硫氰酸胍（guanidiniumisothiocyanale） 聚合酶链式反应（Polymerasechainreaction） PCR 水生栖热菌（Thermusaquaticu） Taq Tris-CI、EDTA缓冲液 TE Tris三（羟甲基）氨基甲烷（tri-hydroxymethylaminomethane） 务平 TritonX-100辛基苯氧基聚乙氧乙醇 4 试剂和仪器 4.1试剂和材料 本标准使用下列试剂和材料： a) 牛、羊、鹿动物源性成分检测用引物（对）序列为： 正向引物：5'-GATCCTCCGTTTGCGTGTA-3° 反向引物：5'-ACAGCCCTATTCCTAGCAAT-3 57